纳豆肽的分离纯化及抗氧化活性测定

目录

摘要

第一章前言

1．1纳豆的概述

1．1．1纳豆营养保健价值

1．1．2纳豆营养保健价值研究现状

1．2生物活性肽的概述

1．2．1生物活性肽的制备方法

1．2．2生物活性肽的作用

1．2．3抗氧化生物活性肽的作用机制

1．2．4抗氧化生物活性肽的构效关系

1．2．5抗氧化生物活性肽的来源

1．3本课题的立题背景及主要内容

1．3．1立题背景

1．3．2研究内容

1．3．2技术路线图

2．1材料与设备

2．1．1实验材料

2．1．2实验试剂

2．1．3实验仪器

2．2纳豆肽制备工艺优化

2．2．1纳豆的发酵

2．2．2纳豆中蛋白质含量的测定

2．2．5蛋白酶的选择

2．2．7单因素实验确定纳豆蛋白酶解条件

2．2．8响应面实验优化纳豆蛋白酶解条件

2．3纳豆肽的分离纯化

2．3．1超滤初步分离纳豆肽

2．3．2凝胶过滤层析初步纯化纳豆肽

2．3．3反相高效液相色谱纯化纳豆肽

2．3．4SDS-PAGE电泳测定纳豆肽相对分子量

2．4纳豆肽对HEK293细胞氧化损伤保护效应的测定

2．4．1HEK293细胞的培养

2．4．2纳豆肽对HEK293细胞的毒性作用

2．4．3HEK293细胞氧化损伤模型的建立

2．4．4纳豆肽对HEK293细胞氧化损伤的保护效应

2．5．1DPPH自由基清除活性的测定

2．5．2ABTS自由基清除活性的测定

2．5．3羟基自由基清除活性的测定

2．5．4超氧阴离子自由基清除活性的测定

2．5．5总还原能力的测定

2．6数据与统计分析

第三章结果与分析

3．1纳豆肽制备工艺优化

3．1．1纳豆发酵

3．1．2纳豆中蛋白质含量的测定

3．1．3蛋白酶的选择

3．1．4单因素实验确定纳豆蛋白酶解条件

3．1．5响应面实验优化纳豆蛋白酶解条件

3．2纳豆肽的分离纯化

3．2．1超滤初步分离纳豆肽

3．2．2凝胶过滤层析初步纯化纳豆肽

3．2．3反相高效液相色谱对纳豆肽进行纯化

3．2．4SDS-PAGE电泳测定纳豆肽相对分子量

3．3纳豆肽对HEK293细胞氧化损伤保护效应的测定

3．3．2HEK293细胞氧化损伤模型的建立

3．3．3纳豆肽对HEK293细胞氧化损伤的保护效应

3．3．4HEK293细胞的SOD、GPX、CAT含量测定

3．4纳豆肽的抗氧化活性测定

3．4．1DPPH自由基清除活性的测定

3．4．2 ABTSI刍由基清除活性的测定

3．3．3羟基自由基清除活性的测定

3．3．4超氧阴离子自由基清除活性的测定

3．3．5总还原能力的测定

第四章讨论

结论与展望

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术成果

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