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饥饿胁迫对斑马鱼生殖发育、细胞生长、自噬活动及DNA甲基化响应机制的研究

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第一章 文献综述

1.1 饥饿胁迫的研究进展

1.1.1 饥饿胁迫的影响

1.1.2 鱼类饥饿胁迫的研究

1.2 鱼类自噬的研究综述

1.2.1 自噬的简介

1.2.2 斑马鱼的自噬

1.3 环境表观遗传学的概述

1.3.1 环境表观遗传的简介

1.3.2 环境胁迫引起DNA 甲基化的跨代遗传效应

1.3.3 环境胁迫引起的其他表观修饰变化

1.4 DNA甲基化的概述

1.4.1 DNA 甲基化的简介

1.4.2 斑马鱼的DNA甲基化

1.4.3 DNMTs 介导的环境遗传效应

1.5 斑马鱼的概述

1.5.1 斑马鱼的简介

1.5.2 斑马鱼胚胎的应用

1.5.3 斑马鱼的发育毒性、生殖毒性和致畸性的研究

1.5.4 斑马鱼的行为学评估

1.6 研究目的与意义

第二章 饥饿胁迫对雌性斑马鱼组织发育的影响

2.1 材料和方法

2.1.1 试验动物

2.1.2 试验试剂

2.1.3 试验仪器

2.1.4 斑马鱼的饥饿处理

2.1.5 生长指标与组织学检测

2.1.6 RNA/DNA比值与营养相关生化指标检测

2.1.7 RNA 的提取与定量PCR

2.1.8 DNA 的提取与斑点杂交(Dot blot)

2.1.9 亚硫酸氢盐测序(BSP)

2.1.10 数据分析

2.2 试验结果

2.2.1 饥饿胁迫对鱼的生长指标、RNA/DNA 比值和血液指标的影响

2.2.2 饥饿胁迫对鱼肝脏组织学及代谢的影响

2.2.3 饥饿胁迫对鱼卵巢繁殖力及自噬相关基因表达的影响

2.2.4 饥饿胁迫对鱼卵子发生相关基因表达及CpG位点甲基化的影响

2.3 讨论

2.3.1 饥饿胁迫影响斑马鱼机体代谢与组织发育

2.3.2 饥饿胁迫降低雌鱼繁殖力、增强卵巢自噬水平

2.3.3 饥饿胁迫下DNA 甲基化调控卵巢中卵子发生

2.4 小结

第三章 母本饥饿胁迫对子代斑马鱼健康状况的影响

3.1 材料和方法

3.1.1 试验动物

3.1.2 试验试剂

3.1.3 试验仪器

3.1.4 母本斑马鱼的饥饿处理与子代斑马鱼的培养

3.1.5 子代胚胎和幼鱼阶段相关生理活动检测

3.1.6 RNA的提取与定量PCR

3.1.7 运动轨迹分析

3.1.8 数据分析

3.2 试验结果

3.2.1 母本饥饿胁迫对子代胚胎阶段生长发育的影响

3.2.2 母本饥饿胁迫对子代幼鱼阶段生长发育的影响

3.2.3 母本饥饿胁迫损伤子代幼鱼的运动能力

3.2.4 母本饥饿胁迫后子代幼鱼自噬相关基因表达的变化

3.3 讨论

3.3.1 母本饥饿胁迫影响斑马鱼子代早期发育进程

3.3.2 母本饥饿胁迫降低子代运动能力与机体自噬水平

3.4 小结

第四章 饥饿胁迫对斑马鱼细胞生长、自噬和凋亡的影响

4.1 材料和方法

4.1.1 试验细胞

4.1.2 试验试剂

4.1.3 试验仪器

4.1.4 细胞的血清饥饿处理

4.1.5 细胞增殖活力、细胞周期、溶酶体活性、凋亡水平检测

4.1.6 透射电镜观察

4.1.7 蛋白免疫印迹(Western blot)和斑点杂交(Dot blot)

4.1.8 RNA的提取与定量PCR

4.1.9 酶联免疫反应检测(ELISA)

4.1.10 数据分析

4.2 试验结果

4.2.1 饥饿胁迫对斑马鱼细胞增殖生长的抑制作用

4.2.2 饥饿胁迫下细胞自噬活动的激活

4.2.3 饥饿胁迫下细胞凋亡活动的增强

4.2.4 饥饿胁迫对DNA 甲基化的影响

4.3 讨论

4.3.1 饥饿胁迫抑制鱼类细胞生长状态与活力水平

4.3.2 饥饿胁迫下细胞自噬与凋亡活动不同程度地增强

4.3.3 饥饿胁迫影响细胞内甲基代谢过程、增强DNA 甲基化水平

4.4 小结

第五章饥饿胁迫对斑马鱼细胞转录组和基因组甲基化的影响

5.1 材料和方法

5.1.1 试验细胞

5.1.2 试验仪器

5.1.3 试验试剂

5.1.4 细胞的血清饥饿处理、血清恢复、抑制剂处理

5.1.5 细胞增殖活力的检测

5.1.6 酶联免疫反应检测(ELISA)

5.1.7 RNA的提取与定量PCR

5.1.8 转录组测序

5.1.9 全基因组甲基化测序(WGBS)

5.1.10 数据分析

5.2 试验结果

5.2.1 饥饿胁迫下斑马鱼细胞的转录组分析

5.2.2 饥饿胁迫对基因组甲基化的影响

5.2.3 饥饿胁迫下转录组和基因组甲基化的联合分析

5.2.4 饥饿胁迫下DNMTs 抑制剂对细胞增殖的挽救

5.3 讨论

5.3.1 饥饿胁迫下细胞内基因表达变化与细胞表型变化一致

5.3.2 基因组DNA甲基化变化表现出染色体和基因区域特异性

5.3.3 营养波动下基因组响应机制揭示DNA 甲基化的重要调控作用

5.4 小结

第六章 结论及创新点

6.1 结论

6.2 创新点

参考文献

附录

致谢

个人简历

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著录项

  • 作者

    范晓腾;

  • 作者单位

    西北农林科技大学;

  • 授予单位 西北农林科技大学;
  • 学科 水生生物学
  • 授予学位 博士
  • 导师姓名 王在照;
  • 年度 2020
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 Q49S89;
  • 关键词

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