声明
第1 章 前 言
1.1 基因组DNA甲基化研究概况
1.1.2 基因组DNA 甲基化的研究进展
1.1.2 去甲基化蛋白TET1和ROS1 的发现及应用
1.2 CRISPR/Cas9 基因编辑技术的发现及研究进展
1.2.1 CRISPR/dCas9 的发现及应用
1.2.2 Cpf1蛋白的发现及应用
1.2.3 SunTag 系统的提出和应用
1.3 植物DNA甲基化的研究进展
1.4 本研究的内容、目的和意义
第2 章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 载体
2.1.2 植物材料
2.1.3 菌株
2.1.4 常用生物学试剂
2.2 实验方法
2.2.1 靶基因的挑选与引物设计
2.2.2 拟南芥基因组 DNA 靶向去甲基化载体的构建
2.2.3 菌落PCR
2.2.4 农杆菌转化(化学转化法)
2.2.5 浸花法浸染拟南芥Col-0获得转基因植株
2.2.6 T1代靶向CACTA1位点与相关转基因植株的阳性鉴定及甲基化水平的相关测定
2.2.7 T1代靶向FWA 位点与相关转基因植株的阳性鉴定及甲基化水平的相关测定
第3 章 结果与分析
3.1 成功构建拟南芥基因组DNA靶向去甲基化系统
3.1.1 拟南芥去甲基化载体骨架的构建
3.1.2 靶标序列的装载
3.2 T1代低甲基化转基因植株的获得
3.2.1 浸花法获得拟南芥转基因植株
3.2.2 鉴定 T1 代阳性转基因植株
3.2.3 分析转基因植株CACTA1 位点甲基化水平
3.2.4 分析转基因植株FWA位点甲基化水平
3.3 转基因拟南芥靶位点DNA甲基化的改变可遗传给后代
3.3.1 T2转基因植株CACTA1 基因表达量的测定及甲基化水平的分析
3.3.2 T3转基因植株CACTA1 基因表达量的测定及甲基化水平的分析
第4 章 讨论与展望
4.1 CRISPR系统介导的植物基因组DNA 靶向去甲基化
4.2 DNA去甲基化靶向编辑系统进一步优化
4.3 DNA去甲基化靶向编辑技术未来展望
致谢
参考文献
附 录
南昌大学;