蜂毒素对胃癌细胞系SGC-7901细胞的抑制作用及与细胞凋亡的关系

摘要

目的：研究蜂毒素对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响并探讨其作用机制，为蜂毒素用于临床方防治癌症提供可靠的理论基础和实验依据。
　　 方法：使用不同浓度（1、2、4、8、16和32 μg/mL）蜂毒素处理SGC-7901细胞不同时间（12、24、36、48和72h）后：（1）采用MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率；（2）光镜下观察药物处理后细胞形态变化；（3）Hoechest33258 染色荧光显微镜下检测细胞核的改变；（4）透射电镜观察细胞超微结构的改变；（5）琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞特征性DNA 条带；（6）流式细胞仪法检测细胞凋亡和细胞周期；（7）免疫组化观察Bcl-2基因和Bax基因表达情况；（8）RT-PCR 检测Bcl-2、Bax、P53、DR4、DR5mRNA的表达。
　　 结果：（1）蜂毒素对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用随着蜂毒素作用时间的延长和浓度的增加而明显增强，蜂毒素作用48h 后，其IC50 为2.43 μg/mL，与对照组比较有显著性差异（P<0.05）; （2）光镜下观察细胞数目减少，变小变圆，失去贴壁生长特性；（3）在荧光显微镜下观察到8 μg/mL 蜂毒素组作用48h 后，细胞出现典型的凋亡形态学改变:细胞核染色质聚集、碎裂,细胞质浓缩（4）透射电镜观察显示蜂毒素组细胞呈凋亡表现，核固缩、碎裂，染色质浓缩，边集;（5）蜂毒素(4、8 μg/mL)组培养48 小时后DNA 琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯状条带，而对照组细胞DNA未见梯状条带；（6）流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”，2、4、8 μg/mL浓度蜂毒素作用人胃癌细胞后的细胞凋亡率分别为5.69±0.74％、10.58±1.32％、29.57±1.58％。（7）免疫组化染色法显示，随着蜂毒素浓度的增大，SGC-7901细胞Bcl-2 阳性表达逐渐减弱，阳性表达率也逐渐降低，Bax 阳性表达逐渐增强，阳性表达率也逐渐增加，各组之间差异均有显著性差异（P<0.05）（8）RT-PCR测定显示Bax mRNA表达上调、Bcl-2 mRNA表达升高下调，Bcl-2/Bax 比率下调，P53、DR4和DR5表达增加，并随蜂毒素浓度增加而加强。
　　 结论：蜂毒素能诱导人胃SGC-7901细胞凋亡和抑制增殖，且有一定的量效关系，其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax、P53基因表达有关。