大鼠骨髓间充质干细胞条件培养基对神经干细胞凋亡及分化的影响

摘要

目的：
　　观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对神经干细胞(NSCs)凋亡及分化的影响。
　　方法：
　　提取第3代大鼠BMSCs条件培养基,进行浓缩。利用无水乙醇对NSCs进行凋亡的诱导,后通过AnnexinV/PI法比较加入条件培养基的实验组和未加入的对照组NSCs和NSCs分化后细胞的凋亡情况。对两组NSCs进行形态学观察、对NSCs分化后细胞进行蛋白印迹实验和细胞免疫荧光检测,比较两组NSCs分化情况。
　　结果：
　　在加入了BMSCs条件培养基的实验组,NSCs的凋亡率明显低于对照组。在加入BMSCs条件培养基的实验组,24 h内见悬浮生长的NSCs球开始贴壁生长。至第3 d,所有悬浮细胞球基本贴壁生长,大量细胞从中爬出,伸出突起。第7 d时,伸出细胞交织成网。对贴壁分化后的NSCs进行免疫化学染色,其表达神经元和胶质细胞的特异性蛋白。而未加入条件培养基的对照组,NSCs仍呈悬浮生长,未见大量细胞贴壁生长及分化。将贴壁分化第七天的NSCs进行免疫荧光发现实验组表达少突胶质细胞标志物MBP的细胞数要高于对照组,而表达星形胶质细胞标志物GFAP的细胞数则有所减低,表达神经元标志物MAP-2的细胞数两组则无明显差别。蛋白印迹实验表明,加入了条件培养基的实验组其MBP的表达要高于对照组,同时GFAP的表达较对照组有所减低,MAP-2则两者无明显差异,这一结果与免疫荧光染色观察到的相符。
　　结论：
　　在完全去除BMSCs本身的情况下,含有大鼠BMSCs分泌的细胞因子的条件培养基对NSCs的凋亡有着明显的抑制作用。在NSCs的分化方面,BMSCs条件培养基可以促进NSCs的贴壁分化,同时不仅增加了NSCs向少突胶质细胞的分化,还减少了向星形胶质细胞的分化。

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1.前言

2.材料和方法

2.1实验材料：

2.2 实验方法

3．结果

3.1 BMSCs的形态观察：

3.2 BMSCs的鉴定：

3.3 NSCs的形态观察及鉴定：

3.4 NSCs分化后形态观察及鉴定：

3.5 BMSC条件培养基对NSCs凋亡的影响：

3.6 BMSC条件培养基对NSCs分化的影响：

3.7 Western blot检测NSCs分化后MBP、GFAP蛋白的表达：

4.讨论：

4.1BMSCs条件培养基对NSCs凋亡的影响及机制：

4.2 BMSCs条件培养基对NSCs分化的影响及机制：

5.结论：

参考文献

附录

致谢

综述