三种真核生物蛋白糖酰胺酶的可溶性重组表达与性质鉴定

目录

声明

摘要

符号说明

1．1蛋白糖基化简介

1．1．1蛋白N-糖基化过程及结构

1．1．2蛋白N-糖键的功能

1．2蛋白N-糖酰胺酶

1．2．1原核生物来源的蛋白N-糖酰胺酶(PNGase F)

1．2．2真核生物来源的蛋白N-糖酰胺酶(Png1p)

1．2．3酵母蛋白N-糖酰胺酶

1．3植物蛋白N-糖酰胺酶研究进展

1．4本论文的目的和意义

第二章拟南芥Png1p在大肠杆菌中的可溶性重组表达与性质鉴定

2．1引育

2．2实验材料

2．2．2主要试剂和试剂盒

2．2．3主要仪器

2．2．4主要培养基和试剂溶液的配置

2．3实验方法

2．3．1目的基因的获得

2．3．2构建筛选大肠杆菌重组表达载体

2．3．3重组蛋白AtPng1p的表达

2．3．4重组蛋白的纯化

2．3．5蛋白浓度及活性测定

2．4实验结果

2．4．2重组AtPng1p的生化性质研究

2．5讨论及小结

第三章酿酒酵母及莱茵绿藻Png1p的克隆、重组表达与活性鉴定

3．1引言

3．2实验材料

3．2．1菌株和载体

3．2．2主要试剂和试剂盒

3．2．3主要仪器

3．2．4主要培养基和试剂溶液的配置

3．3实验方法

3．3．1酿酒酵母yPng1p编码基因的获得

3．3．2莱茵绿藻PNGase编码基因的获得

3．3．3大肠杆菌重组表达载体的构建及筛选

3．3．4重组蛋白表达

3．3．5重组蛋白纯化

3．3．6蛋白浓度及活性测定

3．4实验结果

3．4．2两种重组Png1p的可溶性表达、纯化及鉴定

3．4．3两种重组可溶性表达Png1p的活性鉴定

3．5讨论及小结

全文总结

参考文献

致谢