引言
实验材料
1 主要实验材料及试剂
2细胞系
3主要仪器设备
实验方法
1细胞培养
2 CCK-8法检测细胞存活率
3划痕实验
4 Transwell试验
5免疫印迹法检测A375细胞内相关标记分子的蛋白表达
5.1细胞总蛋白的提取
5.2总蛋白浓度检测
5.3凝胶电泳(SDS-PAGE)
5.4转膜
5.5抗原抗体反应
5.6显影
6 RT-PCR测试
6.1利用Trizol Reagent提取总RNA
6.2反转录
6.3 PCR扩增
7检测c-jun的活性
8 COX-2细胞转染
9统计学分析
结果
1 PG对A375细胞活性的影响
2 PG对A375细胞迁移能力的影响
3PG对A375细胞侵袭能力的影响
4 PG对A375细胞中COX-2 mRNA及蛋白表达的影响
5 COX-2 siRNA和COX-2过表达质粒(COX-2 OE)的有效性
6 COX-2是否是PG对A375细胞迁移作用的靶点
7 COX-2是否是PG对A375细胞侵袭作用的靶点
8 PG对A375细胞中c-jun/c-fos的活性作用的影响
9 PG对A375细胞中c-jun磷酸化的影响
10c-jun抑制剂以及c-jun OE的有效性
11 c-jun通过调节COX-2 mRNA转录对A375细胞发挥转移抑制作用
12 c-jun通过调节COX-2蛋白表达对A375细胞发挥转移抑制作用
讨论
结论
参考文献
综述:黑色素瘤中异常的DNA甲基化:新的生物标志物和治疗策略
综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表(附录)
致谢
声明
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