猪萎缩性鼻炎灭活疫苗的研制

目录

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摘要

第一章文献综述

1．2多杀性巴氏杆菌流行病学

2多杀性巴氏杆菌的致病机制及毒力因子

2．1多杀性巴氏杆菌的致病机制

2．2多杀性巴氏杆菌的毒力因子

3转化生长因子(TGF-β)与细菌感染

4多杀性巴氏杆菌的诊断与治疗

4．1多杀性巴氏杆菌的诊断

4．2多杀性巴氏杆菌的治疗

5多杀性巴氏杆菌疫苗研究及应用

5．1 灭活疫苗

5．2弱毒疫苗

6总结

第二章产毒素性巴氏杆菌toxA基因的原核表达及生物学特性研究

1材料与方法

1．1实验动物

1．2主要试剂

1．3菌种复苏及培养

1．4重组质粒的构建

1．5重组质粒的原核表达、可溶性鉴定及Western blot检测

1．6目的蛋白的纯化及内毒素的去除

1．7 rPMT生物学活性的检测

1．8多克隆抗体的制备及鉴定

2结果

2．1 巴氏杆菌的鉴定

2．2重组质粒的双酶切鉴定

2．3重组蛋白的表达、纯化、鉴定及内毒素检测

2．4体外细胞毒性实验

2．5豚鼠皮肤坏死实验

2．6多克隆抗体鉴定

3讨论

参考文献

第三章猪萎缩性鼻炎灭活疫苗的研制

1 材料方法

1．1实验动物

1．2主要试剂

1．3菌种复苏及培养

1．4细菌培养特性的检测

1．5疫苗的制备

1．6动物实验

1．7鼻部和特定器官的病理组织切片

1．8血清中抗体滴度

1．9重组PMT的细胞最小病变量

1．10检测中和抗体滴度

1．11检测细胞因子浓度

1．12统计学分析

2实验结果

2．1培养特性的检测

2．2病理组织切片

2．3血清中抗体滴度

2．4细胞因子浓度

3讨论

参考文献

第四章TGF-β信号通路调节多杀性巴氏杆菌对细胞的侵入

1材料与方法

1．1试剂

1．2菌株的复苏培养

1．3猪肺泡巨噬细胞的培养

1．4细菌黏附和侵入实验

1．5 TGF-β1表达与多杀性巴氏杆菌侵染实验

1．7 RNA干扰实验

1．8流式细胞术

1．9统计学分析

2实验结果

2．1 巴氏杆菌黏附和侵入细胞实验条件的优化

2．2巴氏杆菌侵染提高TGF-β1的表达

2．4细菌侵染和TGF-β1预处理上调3D4／21细胞α5和Fn的表达

2．5 Fn、α5的表达促进细菌侵入3D4细胞

3 讨论

参考文献

全文总结

附录

攻读硕士学位期间发表论文

致谢