覆土层中有益微生物恶臭假单胞菌对双孢蘑菇生长的影响

摘要

双孢蘑菇是当今世界上人工栽培面积最广的草腐性食用菌。我国是双孢蘑菇的生产大国，拥有世界第一的出口量。在双孢蘑菇栽培过程中，覆土是一个重要的环节。覆土是双孢蘑菇子实体生长和发育的主要场所，是双孢蘑菇栽培的重要物质基础。本文以双孢蘑菇为研究对象，开展覆土微生物恶臭假单胞菌(P.putida)对双孢蘑菇生长的影响研究，结合荧光标记技术，探究恶臭假单胞菌(P.putida)自身在覆土过程中的定殖能力以及对双孢蘑菇菌丝生长、双孢蘑菇产量和品质的影响。综合各方面因素，确定能够促进双孢蘑菇子实体生长发育的微生物菌剂和用量。　　具体结果如下:　　1恶臭假单胞菌(P.putida) TK3属性　　恶臭假单胞菌(P.putida) TK3的对数期为8-14 h，该时期的细菌对抗生素最敏感;菌株TK3具有氨苄霉素(Amp)抗性，不具有卡那霉素(Kana)抗性，对于低浓度(10 ppm、30 ppm、50 ppm)庆大霉素(Gm)具有抗性，对于高浓度(80 ppm、100 ppm) Gm不具有抗性;荧光标记后经过阳性鉴定，红色荧光蛋白成功导入菌体并且没有影响菌体本身属性。　　2恶臭假单胞菌(P.putida) TK3与双孢蘑菇共培养试验　　通过菌丝直径（平板共培养）、菌丝长度（试管共培养）、菌丝生物量（液体共培养）三个方面发现，菌株TK3、菌株TK3(rfp)分别与双孢蘑菇共培养时均对双孢蘑菇菌丝有促进生长作用，红色荧光蛋白没有影响菌株TK3的促生能力;双孢蘑菇192品种在所有共培养方式中都比双孢蘑菇2000品种具有生长优势。　　3菌株TK3(rfp)对双孢蘑菇生长、产量和品质的影响　　覆土层微生物以细菌菌落数最多。细菌数量随菌剂浓度增加而增加，在双孢蘑菇子实体原基形成期数量略下降。菌株TK3(rfp)在覆土层中成功定殖后数量趋于稳定;喷施一定浓度的菌株TK3(rfp)可以增加双孢蘑菇的产量;EM菌剂与菌株TK3(rfp)混合喷施效果好于EM菌剂单一喷施;特定浓度的菌株TK3(rfp)可以提升双孢蘑菇品质。　　综合覆土微生物群落、双孢蘑菇产量、双孢蘑菇品质等方面因素，建议在实际生产中覆土当天立即使用30 mL TK3(rfp)菌剂（即每克土细胞数为106）进行喷施，作为双孢蘑菇高产优质的新手段。

目录

论文说明

声明

摘要

第一章 文献综述

1 双孢蘑菇的形态结构

2 双孢蘑菇的研究价值

2．1 双孢蘑菇的营养价值

2．2 双孢蘑菇的药用价值

3 双孢蘑菇生产现状

4 覆土对双孢蘑菇生长的影响

4．1 覆土材料的理化性质

4．2 覆土层微生物作用

5 恶臭假单胞菌(P．putida)研究进展

5．1 恶臭假单胞菌(P．putida)

5．2 恶臭假单胞菌(P．putida)作用机理

5．3 与食用菌栽培方面相关研究

6 试验技术路线

第二章 恶臭假单胞菌(P．putida)TK3的荧光标记

1 材料与方法

1．1 供试菌株

1．2 培养基配方

1．3 恶臭假单胞菌(P．putida)TK3生长曲线测定

1．4 荧光标记

2 结果与分析

2．1 恶臭假单胞菌(P．putida)TK3的生长曲线

2．2 恶臭假单胞菌(P．putida)TK3的抗性

2．3 荧光标记

2．4 菌株TK3(rfp)的生长曲线

3 讨论

第三章 恶臭假单胞菌(P．putida)对双孢蘑菇菌丝发育的研究

1 材料与方法

1．1 供试菌株

1．2 双孢蘑菇品种

1．3 双孢蘑菇培养料和覆土材料

1．4 共培养方法

1．5 试验处理

2 结果与分析

2．1 平板共培养条件下双孢蘑菇菌丝生长量的变化

2．2 试管共培养条件下双孢蘑菇菌丝生长量的变化

2．3 液体共培养条件下双孢蘑菇菌丝生物量的变化

3 讨论

4 小结

第四章 覆土层接种恶臭假单胞菌(P．putida)TK3(rfp)对双孢蘑菇产量和品质的影响

1 材料与方法

1．1 供试菌株

1．2 供试培养料

1．3 供试覆土材料

1．4 覆土材料的优化处理

1．5 覆土材料及培养料的化学性质测定

1．6 微生物稀释平板计数

1．7 双孢蘑菇品质的测定

2 结果分析

2．1 覆土材料及培养料的化学性质

2．2 平板计数结果

2．3 不同浓度菌液处理对双孢蘑菇产量的影响

2．4 不同浓度菌液处理对双孢蘑菇品质的影响

3 讨论

4 小结

第五章 全文结论与研究展望

5．1 全文总结

5．2 创新点

5．3 不足之处和展望

参考文献

致谢