血吸虫感染小鼠经吡喹酮治疗后疗效考核检测方法的建立与初步评价

摘要

目的：构建 BALB/c小鼠日本血吸虫感染的吡喹酮治疗动物模型，建立并初步评估吡喹酮治疗血吸虫病疗效的考核方法。为进一步临床研究吡喹酮治疗的疗效考核奠定基础。　　方法：经预实验：日本血吸虫感染小鼠模型建立实验（BALB/c小鼠150只）和日本血吸虫感染小鼠吡喹酮治疗模型建立实验（BALB/c小鼠90只），确定日本血吸虫感染小鼠吡喹酮治疗疗效考核方法的建立与评价实验方案。在疗效考核方法的建立与评价的实验中，102只6～8周龄BALB/c小鼠随机分成3组，分别为感染组（37只）、治疗组（37只）和对照组（28只）。感染组和治疗组小鼠经腹部感染血吸虫尾蚴（约25条/鼠）。感染6周时，治疗组第一次吡喹酮治疗，150 mg·kg-1给药，连续3d；2周后进行第二次治疗，剂量300 mg·kg-1，连续3d。实验过程中对小鼠生存情况、肝脾指数和体重进行监测，对小鼠血清中血吸虫可溶性虫卵抗原（Soluble Egg Antigen，SEA）特异性抗体（IgG和IgM）水平的变化通过酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）实验和免疫印迹（Western blot，WB）实验进行检测，采用ELISA方法检测小鼠血清中SEA特异性细胞因子伽马干扰素（interferon-γ, IFN-γ）、白细胞介素4（interleukin-4, IL-4），同时通过酶联免疫斑点（enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT）实验检测小鼠脾淋巴细胞中SEA特异性分泌IFN-γ、IL-4的细胞数量。同时对血吸虫病人治疗前后采用上述方法进行监测。　　结果：1感染血吸虫6～9周的BALB/c小鼠处于急性感染时期；之后的4周为急慢性感染之间的过渡时期，随后病程进入慢性感染期。2小鼠的肝脾指数及体重在血吸虫感染小鼠治疗后明显好转，血清中 SEA特异性抗体（IgG和IgM）、细胞因子（IFN-γ和IL-4）在不同时间均会出现明显下降，血清中 SEA的180kD特异性 IgG在治疗后2周开始降低，43kD、48kD、50kD特异性 IgG在治疗后6周开始降低。3血吸虫感染小鼠治疗后脾细胞中特异性分泌 IFN-γ、IL-4的淋巴细胞数量呈现明显的下降趋势。　　结论：1吡喹酮治疗后血吸虫感染小鼠的肝脾形态及体重变化、血清中 SEA特异性抗体（IgG和IgM）、细胞因子（IFN-γ和IL-4）的联合检测对于吡喹酮治疗血吸虫感染小鼠疗效的考核具有重要价值。2日本血吸虫 SEA的43kD、48kD、50kD、180kD抗原具有较高的疗效考核价值。3小鼠血吸虫模型的疗效考核方法对人体血吸虫病吡喹酮的治疗效果考核具有一定的指导意义。

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引言

第1章 血吸虫感染小鼠吡喹酮治疗疗效考核方法与初步评价

1.1 材料与方法

1.1.1 材料

1.1.2 方法

1.2 结果

1.2.1 血吸虫感染小鼠模型建立实验

1.2.2 血吸虫感染小鼠吡喹酮治疗模型的建立

1.2.3 血吸虫感染小鼠吡喹酮治疗疗效考核方法的建立与评价实验

1.3 讨论

1.3.1 血吸虫感染小鼠模型的建立实验

1.3.2 吡喹酮治疗血吸虫感染模型建立实验

1.3.3 血吸虫感染小鼠吡喹酮治疗疗效考核方法的建立与评价实验

1.4 结论

参考文献

第2章 吡喹酮治疗血吸虫感染的疗效考核方法在人体的观察

2.1材料与方法

2.1.1实验材料

2.1.2 方法

2.2 结果

2.2.1 血清中SEA特异性IgG、IgM水平的变化

2.2.2 血清中IL-4、IFN-γ水平的变化

2.2.3 ELISPOT检测外周血中特异性分泌IFN-γ的淋巴细胞增殖情况

2.3 讨论

2.4 结论

参考文献

第3章 综 述

3.1 血吸虫虫卵的沉积诱导强烈的Th2免疫应急反应

3.2 在感染过程中，CD4+Th2细胞对宿主的保护性作用至关重要

3.3 CD4+细胞的保护机制

3.4 据推断，产生IL-4的Tfh细胞在抗再感染中起着重要作用

3.5 Th2细胞诱导的病理改变

3.6血吸虫病过程中，对Th2反应的调控作用

3.7 IL-10对于Th2反应的调节作用

3.8 Treg细胞对Th2反应的调节作用

3.9 血吸虫病过程中Th2反应机制

参考文献

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