广西北仑河口红树内生真菌的分离纯化及一株内生真菌efHtY2041次级代谢产物的研究

摘要

海洋微生物次级代谢产物的研究已经成为国内外人们关注的研究热点，是众多新药来源的宝贵资源。其中红树林内生真菌是研究的主要之一。根据相关文献报道，从红树林内生真菌次级代谢产物中已经分离得到众多具有生物活性的化合物。本论文是通过对红树林内生真菌次级代谢产物的研究，为海洋药物的开发提供研究基础。　　通过对红树林植物以及红树林内生真菌的介绍和查阅文献来阐述红树林内生真菌的研究进展，并且对本课题进行了介绍。　　本文从广西北仑河口红树林国家自然保护区采集红树植物10种(白骨壤、海芒果、海漆、黄槿、苦郎树、秋茄、卤厥、木榄、银叶树、桐花树)，分别对每种植物的茎组织和叶片组织进行内生真菌的分离。最终从叶片组织分离纯化了24株内生真菌，从茎组织分离纯化了19株内生真菌。对每一株红树林内生真菌进行了小规模液体发酵，收集每种菌株的次级代谢产物的粗提物，以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为试验细菌，进行了简单的抗菌活性实验。内生真菌efHtY2041的次级代谢产物的粗提物表现出一定的抗菌活性。　　将活性菌株efHtY2041发酵培养100L，发酵液恒温浓缩后分别用乙酸乙酯和二氯甲烷进行萃取得到发酵液浸膏。菌体用甲醇进行浸泡，浓缩浸泡液，最后得到菌体浸膏。合并发酵液浸膏和菌体浸膏，分别用柱层析，重结晶等方法对次级代谢产物进行分离纯化，共得到8个化合物。通过波谱数据鉴定了7个化合物，分别是:麦角甾-6，8，22-三烯-3-醇、对羟基苯甲酸、麦角甾-5，7，22-三烯醇、豆甾醇、麦角甾-10-羟甲基-5，24-二烯-1，7-二醇和对羟基苯甲酸乙酯。　　最后总结了本论文的研究成果，展望了研究的应用前景。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 绪论

1．1 红树林内生真菌的研究意义

1．2 红树林内生真菌的研究进展

1．3 课题研究意义与设计

第二章 广西北仑河口红树内生真菌的分离纯化及活性初筛

2．1 导言

2．2 红树林植物的来源

2．3 实验仪器与试剂

2．3．1 实验仪器

2．3．2 实验试剂

2．4 红树林内生真菌的分离

2．4．1 培养基

2．4．2 无菌纸、无菌水、消毒酒精和消毒用次氯酸钠的准备

2．4．3 红树林茎中内生真菌的分离

2．4．4 红树林叶中内生真菌的分离

2．5 红树林内生真菌的液体发酵

2．5．1 菌种预处理

2．5．2 培养基

2．5．3 菌种的液体发酵

2．5．4 发酵液的处理

2．6 菌株次级代谢产物抗菌活性的初步筛选

2．6．1 实验菌株

2．6．2 培养基

2．6．3 接种斜面的制备

2．6．4 菌种次级代谢产物的抗菌实验

2．7 小结

第三章 活性菌株efHtY2041次级代谢产物的研究

3．1 导言

3．2 实验仪器及试剂

3．2．1 实验仪器

3．2．2 实验试剂

3．3 红树林内生真菌efHtY2041的发酵培养

3．3．1 菌种

3．3．2 发酵培养

3．3．3 发酵液以及菌体的处理

3．4 红树林内生真菌efHtY2041次级代谢产物的分离纯化

3．5 化合物结构的鉴定

3．6 化合物波谱数据及理化常数

3．7 小结

第四章 结论及展望

4．1 结论

4．2 研究展望

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表的学术论文