菟丝子含药血清对TNF-α作用下人蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

摘要

目的:建立人蜕膜细胞细胞体外培养体系;采用TNF-a诱导构建细胞凋亡损伤模型,筛选适宜浓度菟丝子含药血清进行干预,通过蛋白质印迹法(Western Blot)检测与含药血清作用24h后,在TNF-α干预下蜕膜细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,从细胞凋亡的途径探讨中药菟丝子对蜕膜细胞靶器官的作用机制。　　方法:(1)体外常规进行人蜕膜细胞的培养,经免疫组化鉴定建立细胞培养体系。(2)采用MTT法检测TNF-α和TNF-α+菟丝子对人蜕膜细胞的细胞增殖抑制率的影响,筛选适宜 TNF-α浓度造模及适宜的菟丝子含药血清作用浓度,AnnexinV/PI双染检测TNF-α和TNF-α+菟丝子作用下人蜕膜细胞凋亡率。(3)采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测正常对照组、TNF-α组、TNF-α+菟丝子组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。　　结果:(1)成功的获取了相当数量的人蜕膜细胞,经免疫细胞化学鉴定,建立了高纯度的体外细胞培养体系。(2)TNF-α能明显影响人蜕膜细胞的活性,增殖阻滞,且随浓度增加细胞的抑制率增加,可建立细胞凋亡模型,且较适合浓度为10.0ng/ml;菟丝子含药血清一定程度上增加了 DSC的细胞活性,流式细胞仪检测凋亡率较空白组明显升高(P<0.05),菟丝子含药血清能够降低TNF-α诱导的细胞凋亡,与TNF-α组比较差异具有显著性意义(P<0.05)。(3)Westernblot蛋白印迹检测Bcl-2及 Bax蛋白表达变化:模型组细胞与空白组细胞比较促凋亡蛋白Bax的表达增加,有显著性差异(P<0.05),抑制凋亡蛋白Bc1-2的表达降低,有显著性差异(P<0.05);TNF-α+菟丝子含药血清组细胞与模型组细胞比较促凋亡蛋白 Bax的表达降低,有显著性差异(P<0.05),抑制凋亡蛋白Bc1-2的表达增加,有显著性差异(P<0.05)。　　结论:(1)本研究采用胶原酶和胰酶联合消化培养法建立了高纯度的人蜕膜细胞体外培养体系。(2)菟丝子含药血清可逆转TNF-α诱导的蜕膜细胞的增殖阻滞,明显降低蜕膜细胞的凋亡率,维持蜕膜细胞的增殖和凋亡平衡。(3)在分子水平,菟丝子含药血清可有效调节蜕膜细胞的增殖凋亡,维持蜕膜细胞、滋养细胞的增殖凋亡平衡和胎盘营养的供应,能够调节妊娠子宫内膜的微环境,通过降低细胞凋亡率和 Bax水平,增高Bcl-2水平达到保胎作用,维持妊娠。

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引言

正文

1 实验材料与仪器

1.1 实验动物

1.2 主要试剂与药品

1.3 主要试剂的配制

1.4 主要仪器与设备：

2 实验方法