中国汉族人群中IL1β、IL10基因多态性及miRNA与IgA肾病发病的关联性研究

摘要

目的：IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)属于常见的原发性肾小球肾炎之一,是由大量IgA颗粒、IgA为主的免疫复合物颗粒沉积于肾小球系膜区的一种原发性肾小球肾炎。IgA肾病是引起终末期肾病最为重要的病因,其发病率在不同地区、不同种族间差异较大,同时还存着明显的家族聚集性。从IgA肾病的发病机制上看,IgA肾病属于与免疫反应有关的疾病,与多种致病因素有关,但目前其病因和发病机制尚未完全明确,通常认为与免疫紊乱、炎症反应、感染、遗传因素等有关,随着分子生物学技术的不断发展,国内外的一些研究证实IgA肾病发病及进展的原因与遗传因素有关。本次研究分为两部分,第一部分主要针对免疫炎症相关的细胞因子基因单核甘酸多态性,选取了IL1β及IL10两个基因的主要位点,探讨候选基因SNP与IgA肾病发生及发展的关系,第二部分主要针对既往文献报道与IgA肾病可能有关的miRNA,分析miRNA水平与IgA肾病主要临床表现及肾脏功能的相关性,从而探讨miRNA对IgA肾病易感性、病情进展的影响作用,通过以上两部分的研究,旨在得出本地区居民IgA肾病发病及发展的研究资料,为IgA肾病制定临床早期诊断和干预手段提供一定的参考。
　　方法：1)本研究采用频数匹配的病例对照研究设计方式,收集2012年2月-2014年10月间,在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院确诊的IgA肾病患者184例作为病例组,选择同时期在我院体检中心接受健康体检的人群作为对照组,按照病例组性别及年龄分组的频数进行匹配,最终共纳入237名调查对象纳入对照。收集病例组及对照组研究对象的医疗记录,获取调查对象基本信息及临床资料,内容包括年龄、性别、职业、学历、婚姻状况、收缩压、舒张压、血清IgA(sIgA)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN),比较病例组及对照组基本信息的差异。
　　2)使用EDTA-Na2抗凝管采集调查对象外周静脉血5ml,采用sequenom MassARRAY平台,运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)法,对IL1β-511C＞T、IL1β-31T＞C、IL1β+3953T＞C、IL10-592A＞C、IL10-819C＞T、IL10-1082A＞G6个基因位点进行多态性检测,分析这6个位点在病例组及对照组当中的等位基因频率及基因型频率分布,采用单因素及多因素非条件Logistic回归,探讨候选基因位点的多态性与IgA肾病易感性的关系,分析患者当中候选基因位点的多态性与主要临床表现(高血压、肾功能不全、大量蛋白尿、肉眼血尿)之间的关联性,通过SHEsis软件分析IL1β的3个位点、IL10的3个位点的连锁不平衡状态,并进行单体型构建,分析单体型与IgA肾病发病风险的关系。以基因多态性分析结果为基础,进一步分析与IgA肾病发病有关的基因与基因之间是否存在交互作用,以及交互作用对易感性的影响。
　　3)采集健康对照及患者确诊后当日的中段晨尿100ml,采用Trizol试剂盒提取尿样标本中的总RNA,通过试剂盒法,对miR-141、miR-146a、miR-155、miR-192、miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-205、miR-4299个miRNA的表达水平进行RT-qPCR检测。用两独立样本t检验比较IgA肾病患者与正常对照之间miRNA表达水平的差异。采用spearman秩相关分析IgA肾病患者miRNA表达水平与临床表现的相关性,以及IgA肾病患者miRNA表达水平与katafuchi积分的相关性,从而分析目标miRNA表达水平与IgA肾病患病易感性及病情进展的关系。
　　结果：第一部分：1)病例组及对照组调查对象平均年龄、性别、文化程度、居住地、婚姻状况、职业等一般人口学特征差异无统计学意义(P＞0.05),在两组间均衡可比。
　　2)对本次候选基因的6个SNPs位点在对照组中进行Hardy-Weinberg平衡吻合度检验,结果显示,除IL1β-511C＞T和IL1β-31T＞C外(p值＜0.01),其余各基因位点的基因型的分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P值分别为0.878、0.999、0.838、0.576),表明本次研究对象的基因频率分布具备不错的代表性。
　　3)IL1β-511C＞T、IL10-819C＞T两个位点的等位基因频率在两组间的分布差异无统计学意义(P＞0.05),而IL1β-511C＞T、IL1β-31T＞C、IL1β+3953T＞C、IL10-1082A＞G四个位点的等位基因频率在两组间的分布差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　4)IL1β-31T＞C、IL10-592A＞C、IL10-819C＞T三个位点基因型频率在两组间的分布差异无统计学意义(P＞0.05),而IL1β-511C＞T、IL1β+3953T＞C以及IL10-1082A＞G三个位点的基因型频率在两组间的分布差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　5)单因素非条件Logistic回归结果显示,IL1-511C＞T的CT+TT基因型与CC基因型相比,能够增加IgA肾病的发病风险(OR=1.945,95％CI=1.205-3.139);IL1B-31T＞C的TC+CC基因型与TT基因型相比,能够增加IgA肾病的发病风险(OR=1.590,95％CI=1.014-2.493);IL1β+3953T＞C的TC+CC基因型与TT基因型相比,能够增加IgA肾病的发病风险(OR=1.905,95％CI=1.180-3.076);IL10-1082A＞G的AG+GG基因型与AA基因型基因型相比,能够增加IgA肾病的发病风险(OR=1.678,95％CI=1.137-2.477)。而IL10-592A＞C、IL10-819C＞T两个位点均未发现与IgA肾病的发病具有关联性(P＞0.05)。
　　第二部分：1)根据尿样本中miRNA表达水平检测的结果,miR-141、miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-429在IgA肾病患者中的表达水平低于正常对照组(P＜0.05),而miR-146a、miR-155在IgA肾病患者中的表达水平高于正常对照组(P＜0.05),miR-192、miR-205在两组间表达水平无差异(P＞0.05)。
　　2)miR-141的表达水平与肉眼血尿呈负相关(r=-0.222,P=0.002),miR-146a的表达水平也与肉眼血尿呈负相关(r=-0.170,P=0.021),而其余miRNA与高血压、肾功能不全、大量蛋白尿、肉眼血尿几项临床表现均未发现具有统计学意义的相关性(P＞0.05)。
　　3)miR-146a表达水平与肾小管间质积分呈正相关(r=0.206,P=0.005),而miR-155的表达水平与肾小管间质积分呈负相关(r=-0.204,P=0.006),其余miRNA的表达水平未见与katafuchi积分的三个主要维度的得分情况有相关性(P＞0.05)。
　　4)本次研究的目标miRNA表达水平未见与katafuchi肾小球积分三个分项的得分情况有相关性(P＞0.05)。
　　5)miR-146a表达水平与肾小管间质炎细胞浸润积分呈正相关(r=0.196,P=0.008),而miR-155的表达水平与肾小管间质纤维化积分呈负相关(r=-0.162,P=0.028),与肾小管萎缩积分呈负相关(r=-0.213,P=0.004),其余miRNA的表达水平未见与katafuchi肾小管积分的三个主要分项的得分情况有相关性(P＞0.05)。
　　结论：1)IL1β-511C＞T的CT+TT基因型、IL1β-31T＞C的TC+CC基因型、IL1β+3953T＞C的TC+CC基因型、IL10-1082A＞G的AG+GG基因型能够增加IgA肾病的发病风险。
　　2)IgA肾病患者携带IL10-819C＞T的CT+TT基因型出现高血压的风险较低。
　　3)IL1β基因三个位点未发现连锁不平衡关系,但CTC、CCT、TTC、TCC四种单体型在病例组及对照组间的分布有差异。IL10基因的四个位点未发现连锁不平衡关系,但ACA、ACG、CTG三种单体型在病例组及对照组间的分布有差异。
　　4)IL1β-511C＞T CT+TT与IL1β-31T＞C TT基因型之间、IL1β-511C＞T CT+TT与IL10-1082A＞G AG+GG之间、IL1β-31T＞C TC+CC与IL1β+3953T＞C TC+CC之间、IL1β-31T＞C TC+CC与IL10-1082A＞G AA之间、IL1β-31T＞C TC+CC与IL10-1082A＞G AG+GG之间存在交互作用。
　　5)miR-141、miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-429在IgA肾病患者中的表达水平低于正常对照组,而miR-146a、miR-155在IgA肾病患者中的表达水平高于正常对照组。
　　6)miR-141、miR-146a的表达水平与肉眼血尿呈负相关。
　　7)miR-146a表达水平与katafuchi肾小管间质积分、肾小管间质炎细胞浸润积分呈正相关;miR-155的表达水平与肾小管间质积分、肾小管间质纤维化积分、肾小管萎缩积分呈负相关;miR-192表达水平与血管透明样变积分呈正相关;miR-200c的表达水平与血管壁增厚积分呈负相关。

目录

声明

摘要

符号说明

研究背景

第一部分 中国汉族人群中IL1β、IL10基因多态性与IgA肾病发病的关联性研究

前言

1．对象与方法

2．结果

3．讨论

4．小结

第二部分 中国汉族人群中miRNA与IgA肾病发病的关联性研究

前言

1 材料与方法

2．结果

3．讨论

4．小结

附图附表

参考文献

致谢

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