MPS病和GSDⅡ病患者的基因诊断和基因治疗探索

摘要

粘多糖病(Mucopolysaccharidoses，MPS)是一组由于粘多糖降解酶缺乏，使之不能完全降解而引起的溶酶体贮积症，根据缺失的酶不同共分为7种类型(MPS I～VII)；糖原累积症II型(Pompe’disease，glycogen storage type II，GSD II)是由于酸性-α-葡萄糖苷酶缺乏，使糖原无法正常分解而引起的溶酶体贮积症。上述两类遗传病均是由于相关基因的突变引起的，目前的治疗方法主要是骨髓移植和酶替代疗法。但骨髓移植难以找到合适的供体；酶替代疗法的重组酶价格昂贵、治疗费用高，并且因无法透过血脑屏障，对智力缺陷的患者不能起到治疗作用。基于上述原因，有必要探索针对上述两类遗传病的新的治疗途径。 同源重组技术，也称基因打靶，是迄今为止改造致病基因的最安全有效途径。采用基因打靶技术，在患者体细胞水平上对致病基因进行修复，然后应用体细胞克隆技术获得重组胚，分离出胚胎干细胞(ES cells)，经过体外定向诱导分化，使之成为所需要的细胞、组织或器官，移植回病人体内将不会受到免疫排斥，此方法也称治疗性克隆。目前已成为许多国家的重点研究课题。近年来，利用腺相关病毒(AAv)载体进行基因治疗，由于方法简单易行，该领域研究也相当活跃。 在本课题中，首先，用分子遗传学方法对MPS I、II、VI和GSD II病患者进行基因突变分析，共发现7个国际上从未报道过的人类新突变(http://WWW：hgmd.org)，并首次完成了对我国大陆MPS VI和GSD II患者的遗传突变分析和基因突变功能鉴定，从而明确了患者发病的分子遗传学机制，为开发治疗性克隆途径奠定了基础。其次，利用近年来诞生的recombineering技术，成功地构建了人类GSD II和MPSI致病基因打靶载体，该打靶载体设计完成时国内外均未见同类报道，为患者细胞水平上的基因打靶修复和探索治疗性克隆途径奠定了基础。最后，为了探索AAV基因治疗途径的可行性，对GSD II病进行了AAV细胞水平上的基因治疗研究，发现可以修复人类GAA—deficient fibroblasts的GAA酶活性，但是无法做到在细胞内持续表达，因此在GSD工工病的临床基因治疗中，AAV不是一种合适的载体。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略表

上海交通大学学位论文原创性声明及版权使用授权书

第一章GSD Ⅱ型和MPS Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅵ型患者的基因诊断

第二章GSDⅡ型和MPSⅠ型致病基因打靶载体的构建

第三章GSD Ⅱ病腺相关病毒体外基因治疗的研究

结论

综述 基因打靶技术及其发展和应用

致谢

攻读学位期间主要研究成果

上海交通大学学位论文答辩决议书