工厂化循环水养殖半滑舌鳎主要细菌性疾病及其控制

摘要

鲆鲽类工厂化养殖是一种新型的养殖方式并在全国沿海逐步推广。然而,循环水养殖系统中经常有养殖动物大量死亡的报道,给养殖企业带来了较大的经济损失。笔者对青岛及烟台地区几家采用循环水养殖半滑舌鳎的养殖厂中常见的细菌性疾病及其流行特征进行了调查研究,发现“腹水病”、“皮肤溃疡”和“脓肿病”是循环水养殖半滑舌鳎最常见的细菌性疾病,对养殖成活率构成了严重威胁。
　　感染腹水病的半滑舌鳎病鱼外观表现为腹部隆起,严重时因腹腔充满积水将消化道从泄殖孔挤压出体外,解剖后可在腹腔或消化道内发现大量积水。镜检积水,可在视野内发现大量细菌。采用TSB与 TCBS培养基平板划线分离的方法,从腹水中分离出一株细菌(CS11061001B),其在 TSB平板上的单菌落优势度达到了90％,经生理生化检验以及分子生物学鉴定,确定为鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)。用Davidson’s AFA固定液对病鱼的主要组织器官进行固定并制作病理切片。观察结果显示,感染腹水病的半滑舌鳎肝脏、脾脏、肠道等主要组织器官都发生了较严重的病变,相关器官的生理功能受到严重损害。
　　从感染“皮肤溃疡病”的半滑舌鳎体表病灶处分离出两株优势度较高的细菌,分别对其进行了生理生化试验及16S rDNA分析,结果显示两株细菌(CS10111602A、CS10111602B)分别为灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。通过肌肉注射的方式对健康的半滑舌鳎进行了人工感染试验,两株菌均能引起健康半滑舌鳎出现明显的皮肤溃疡症状,并从被感染的病鱼病灶再次分离得到了菌落相同的优势菌株。对病鱼病灶处的肌肉组织制作病理切片并进行观察,发现皮肤表层细胞坏死、脱落,皮下肌肉组织中肌细胞萎缩,肌纤维断裂并发生糜烂,其间有明显的血细胞浸润。
　　另外,本文也对半滑舌鳎苗期的“脓肿病”进行了初步研究。从患病半滑舌鳎的脓肿部位分离出一株优势细菌(CS10111501A),该菌在 TSB琼脂培养基上生长缓慢,菌落圆形、透明,革兰氏染色为阴性。16S rDNA基因同源性分析发现其与波氏弧菌(Vibrio pomeroyi)聚为一类,且在 NCBI数据库上两者比对结果的相似性达到了99%,初步确定该菌株为波氏弧菌。
　　循环水净化包括弧形筛过滤、曝气气升、生物包过滤、紫外线消毒等过程。本文以皮肤溃疡病致病菌灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)为指示菌,通过对半滑舌鳎循环水养殖系统中各环节细菌分布和消除效果的研究表明:病原菌可分布在鱼体、残饵、池壁污物及循环水各处理环节,不健康苗种和养殖工具也可携带病菌。除菌效果显示:弧形筛过滤、曝气池气升、紫外线消毒是消除细菌的三大环节。采用5×10-6的KMnO4溶液浸泡2h对工具上细菌的杀灭率达到100%;使用25×10-6的KMnO4溶液擦拭养殖池池壁污物1.5min后细菌杀灭率高于90%;100×10-6的H2O2对养殖舌鳎体表进行药浴消毒处理10min,对其体表病原菌的杀灭率达到了94.49%。
　　本文针对半滑舌鳎循环水养殖系统中主要细菌性疾病的流行病学、病原学、病理学开展研究,同时还系统性开展了循环水养殖系统中病原菌的分布及消除方法研究。首次揭示了半滑舌鳎腹水病、皮肤溃疡病的流行病学、病原学、病理学特征,并对各种病原菌进行了药敏分析;本文也率先对鲆鲽鱼类循环水养殖系统中细菌的分布和消除效果进行系统性研究。上述数据与成果,将为建立循环水健康养殖工艺提供理论参考,也为养殖生产上进行疾病防控提供了有力的技术支撑。

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引言

0.1 半滑舌鳎的生物学及养殖现状

0.2 半滑舌鳎研究进展

0.3 半滑舌鳎疾病研究

第一章工厂化养殖半滑舌鳎“腹水病”的流行病学及病理学研究

1.1 材料与方法

1.2 结果

1.3 讨论

第二章工厂化养殖半滑舌鳎“皮肤溃疡病”的流行病学及病理学研究

2.1 材料与方法

2.2 结果

2.3 讨论

第三章工厂化养殖半滑舌鳎“脓肿病”的流行病学及病原学初探

3.1 材料与方法

3.2 结果

3.3 讨论

第四章重要病原菌的分布与消除工艺

4.1 材料与方法

4.2 结果

4.3 讨论

论文总结

参考文献

附录

致谢

研究成果