猕猴桃属植物自然居群的遗传结构与种间基因渐渗研究

摘要

猕猴桃隶属于猕猴桃科猕猴桃属，为多年生木质藤本植物，雌雄异株，是一种重要的果树资源。在我国野生资源丰富，是半特有属。随着生态环境的破坏和猕猴桃产业化的发展，为了解决全世界猕猴桃产业支柱建立在单一的雌性品种上的遗传风险，需了解其自然资源现状，提出有效的保护和利用措施，通过育种手段，获得高产、优质的品种是实现猕猴桃产业健康发展的必经之路。另一方面，猕猴桃种间杂交和种内多倍化现象的普遍存在，使物种间界限不明显，了解种间的遗传结构和基因渐渗现象，可以为猕猴桃属植物的系统进化和分类关系提供重要的理论依据。 本文结合以上几个方面，以中华猕猴桃和美味猕猴桃为主，同时涉及阔叶猕猴桃、毛花猕猴桃、绵毛猕猴桃、金花猕猴桃和京梨猕猴桃等7个分类群，利用SSR标记从DNA水平上对10个同域分布的不同物种自然居群进行了遗传多样性、居群遗传结构的分析以及种间杂交渐渗的探讨。主要结果如下： (1)利用9对SSR引物，在猕猴桃属7个物种共747个样本上共检测到253个等位基因，平均每位点等位基因数为 28.11个，扩增等位基因数最多的位点为UDK96-009(48个)。在同域分布物种问的共有等位基因上，中华猕猴桃和美味猕猴桃的共有等位基因的比率最高，达60％以上；而湖北莽山 (HM) 毛花猕猴桃和金花猕猴桃物种间共有等位基因比率最低为 18.5％。共享等位基因表型频率在物种间存在着差异，而且与各同域分布物种样本的交错程度或间距存在关联。 (2) 居群内遗传多样性分析表明：各物种居群内等位基因平均数 A 为4.45～14.441；多态位点百分率P=100，PIC值为0.644～0.870，表明猕猴桃属植物自然居群具有极高的遗传多样性。各物种居群间的分化系数依次为：美味猕猴桃(0.080)<中华猕猴桃(0.086)<毛花猕猴桃(0.116)<金花猕猴桃(0.118)<阔叶猕猴桃(0.119)。两两物种间的遗传分化系数平均范围在0.008～0.108，同域分布物种间的遗传分化低于物种内异域居群间的遗传分化，其中同域分布的中华猕猴桃和美味猕猴桃两物种间的基因流均为最高，其余物种间的基因流也都大于1。利用AMOVA分析结果同样表明：大部分遗传变异来源于居群内(79.45％)，居群间遗传分化系数为0.1698。 (3) 居群 UPGMA聚类揭示中华猕猴桃和美味猕猴桃以地理区域优先聚类，其它物种多以物种分类群优先聚类，个体聚类结果显示多数个体聚在各自居群组内，但各地理居群并不按地理距离的远近聚类，这与Mantel相关性检测所揭示的居群间遗传距离与地理距离没有显著性相关的结果一致。中华/美味猕猴桃复合体近缘种间存在明显的共祖多态性和杂交渐渗现象，近缘种植株分布的交错程度或是否存在亚居群结构是影响杂交渐渗的因素之一。阔叶猕猴桃和毛花猕猴桃也存在着非对称性基因渐渗，表明亲缘关系较远的物种间杂交渐渗事件稀少，但存在个别同塑事件。 (4)采用空间自相关分析方法对河南西峡和陕西商南同域分布的中华猕猴桃和美味猕猴桃自然居群SSR遗传变异的空间结构进行了分析，选用的9对SSR引物分别从两居群中共扩增出104个等位基因，选择其表型频率在20％～80％的SSR等位基因，运用等样本频率方法分别对中华猕猴桃和美味猕猴桃及其中华/美味猕猴桃复合体居群进行了空间自相关系数Moran’s I值计算。结果表明：中华猕猴桃和美味猕猴桃的遗传变异在两居群内均存在着一定程度的空间结构，尽管近半数或半数以上的等位基因在居群内表现为随机分布的空间模式，但也有相当比例的等位基因在居群内(29.6％～48.0％)和复合体居群内(51.0％，44.7％)呈现渐变、衰退、双向衰退或侵扰模式。而且其居群内遗传变异的空间分布规律都基本一致：相距在100 m以内，特别是30 m范围内的个体问的等位基因表现出显著性的正相关，随着地理距离的增大逐渐显示出负相关。 本文通过SSR分子标记，运用不同的统计软件对结果进行分析，从不同的方面揭示了猕猴桃属植物中存在较高的遗传多样性和物种间的基因渐渗，进一步分析表明猕猴桃的遗传多样性和居群遗传结构不仅受其广域分布、远交、晚期分化等生活史特性的影响，同时还与猕猴桃的染色体基数高(x=29)、倍性复杂和种间杂交等因素密切相关。本研究结果有助于进一步探讨猕猴桃属植物的遗传变异、种群扩散及其地理系统发育进化等方面的规律，并为制定相应的保育策略和措施提供了基础数据和科学依据。

目录

文摘

英文文摘

声明

Ⅰ前言

1猕猴桃属植物的历史起源、地理分布及资源现状

1.1猕猴桃属植物的历史起源

1.2猕猴桃属植物的地理分布

1.3猕猴桃属植物经济价值及资源开发现状

2猕猴桃属植物的遗传多样性研究

2.1保护植物遗传多样性的意义

2.2遗传多样性的遗传学效应

2.3猕猴桃属植物的遗传多样性

3植物居群遗传变异的空间自相关分析

4杂交渐渗的研究

5分子标记技术在植物研究中的应用

5.1分子标记

6猕猴桃SSR研究进展

7本研究的目的和意义

Ⅱ材料与方法

1试验材料

2试验方法

2.1基因组总DNA的提取及检测

2.2引物的选择

2.3 PCR扩增及产物检测

3数据记录与分析

3.1遗传多样性分析

3.2空间自相关分析

3.3聚类分析

Ⅲ结果与分析

1猕猴桃基因组DNA的提取结果

2猕猴桃自然居群的微卫星分析结果

2.1猕猴桃属物种在各位点上的扩增谱带

2.2猕猴桃属7个物种的遗传多样性分析

3同域分布猕猴桃物种的遗传多样性分析

3.1同域分布猕猴桃物种的共有和特有等位基因

3.2同域分布猕猴桃居群间的遗传分化

3.3猕猴桃属植物分子变异方差分析(AMOVA)

4中华猕猴桃和美味猕猴桃物种在河南西峡(HX)和陕西商南(SS)居群中的空间自相关分析

4.1河南西峡(HX)中华猕猴桃和美味猕猴桃居群遗传变异的空间分布

4.2陕西商南(SS)中华猕猴桃和美味猕猴桃居群遗传变异的空间分布

5聚类分析

5.1基于Nei's无偏遗传距离的UPGMA聚类分析

5.2基于贝叶斯方法的聚类分析

Ⅳ小结与讨论

1 DNA的质量与分子标记

2猕猴桃自然居群的SSR遗传多样性和遗传结构的分析

2.1猕猴桃自然居群的SSR遗传多样性分析

2.2猕猴桃自然居群遗传分化

3中华猕猴桃和美味猕猴桃复合体居群的遗传多样性分析

3.1两物种居群间的遗传分化

3.2中华猕猴桃和美味猕猴桃复合体居群的空间遗传结构分析

3.3中华/美味猕猴桃的亲缘关系和同域物种居群的基因渐渗

4阔叶猕猴桃和毛花猕猴桃物种间基因渐渗的分析

5遗传多样性和居群遗传结构对猕猴桃种质资源保育策略的启示

6杂交渐渗对猕猴桃种质资源保育策略的影响

参考文献

致谢

附录