四棱豆凝集素的分离纯化及抗蚜活性的研究

摘要

四棱豆(Psophocarpus tetragonoIobus)成熟种子经粉碎、磷酸盐缓冲溶液浸取、硫酸铵分段盐析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析得到对兔血红细胞有高效凝集活性的四棱豆凝集素(winged beanacidic aggIutinin，WBA Ⅱ)。纯化的WBAⅡ经不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析显示一条带。测定不同pH、温度、紫外光照时间和不同浓度变性剂脲对WBA Ⅱ活性的影响，试验结果表明：WBA Ⅱ在pH3.O-10.0。保持凝血活力不变；60℃时凝集活性开始下降，至90~C时活性完全消失；紫外光照时间40min以上活性开始下降。当脲浓度达到4mol/L时，WBAⅡ活性完全消失。 对WBAⅡ的杀虫活性、作用机理等研究，结果表明：WBAⅡ对蚜虫的蜜露分泌数、生长和生殖有一定的抑制作用，对蚜虫具有一定的忌避作用和较强的胃毒作用。以2％凝集素粗品处理蚜虫，1 d、2d后的蜜露分泌抑制率为30.00％、57.62％：24h、48h、72h后蚜虫的取食定居百分比为16％、14％、6％； 3d、4d后死亡率为54％、82％；2d、3d、4d、5d后产若蚜数为O.01、0.04、0.04、O.04头；2d、3d、4d、5d后体重增长抑制率分别为浓度为26.09％、28.04％、39.23％、52.62％。以0.25％凝集素层析纯样品处理蚜虫，1 d、2d后的蜜露分泌抑制率为41.67％、61.67％；24h、48h、72h后蚜虫的取食定居百分比26％、20％、6％；3d、4d后其死亡率为38％、78％；2d、3d、4d、5d后产若蚜数为0.08、0.28、0.24、0.14头；2d、3d、4d、5d后体重增长抑制率为27.94％、44.46％、66.16％、71.14％。WBAⅡ层析纯样品影响蚜虫糖原含量和蛋白含量；在活体条件下，抑制蚜虫消化液蛋白酶、消化液淀粉酶的活性，且浓度越高，抑制作用越强。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一章材料与方法

1.1供试品种与试剂

1.2主要仪器设备

1.3 WBA Ⅱ的分离提纯

1.3.1 WBA Ⅱ粗品的制备

1.3.2 DEAE-52离子交换层析

1.3.3 Sephades G-100分子筛层析

1.3.4 WBA Ⅱ的纯度鉴定

1.4 WBA Ⅱ部分性质研究

1.4.1凝血活力检测

1.4.2蛋白质浓度测定

1.4.3中性糖测定

1.4.5不同pH对WBAⅡ活性的影响

1.4.6不同温度对WBAⅡ活性的影响

1.4.7不同光照时间对WBAⅡ活性的影响

1.4.8不同脲浓度对WBAⅡ活性的影响

1.5 WBAⅡ对蚜虫的抗性研究

1.5.1蚜虫人工饲养液配方

1.5.2蚜虫饲养装置

1.5.3 WBA Ⅱ对蚜虫蜜露分泌抑制作用的测定

1.5.4 WBAⅡ对蚜虫忌避作用的测定

1.5.5 WBA Ⅱ对蚜虫胃毒作用的测定

1.5.6 WBA Ⅱ对蚜虫生长抑制的作用

1.5.7 WBA Ⅱ对蚜虫生殖抑制作用的测定

1.6.WBA Ⅱ抗蚜的作用机理

1.6.1蚜虫体内总糖原含量的测定

1.6.2蚜虫体内蛋白质含量的测定

1.6.3蚜虫消化液蛋白酶活性的测定

1.6.4蚜虫消化液淀粉酶活性的测定

第二章结果与分析

2.1 WBAⅡ的分离提纯

2.1.1 WBAⅡ的分离提纯与检出

2.1.2 WBAⅡ的纯度鉴定

2.2不同条件对WBAⅡ凝集活性的影响

2.2.1不同pH对WBAⅡ凝集活性的影响

2.2.2不同温度对WBAⅡ凝血活力的影响

2.2.3不同光照时间对WBAⅡ凝集活力的影响

2.2.4不同脲浓度对WBAⅡ凝血活性的影响

2.3WBAⅡ对蚜虫的抗生作用

2.3.1.WBAⅡ对蜜露分泌抑制作用测定

2.3.2 WBAⅡ对蚜虫的忌避作用测定

2.2.3 WBAⅡ对蚜虫的胃毒作用测定

2.3.4 WBAⅡ对蚜虫生长抑制作用测定

2.3.5 WBAⅡ对蚜虫生殖抑制作用的测定

2.4 WBAⅡ对蚜虫抗生作用机理

2.4.1 WBAⅡ对蚜虫体内糖原含量的影响

2.4.2 WBA Ⅱ对蚜虫体内蛋白质含量的影响

2.4.3 WBAⅡ对蚜虫消化液蛋白酶活性的影响

2.4.4 WBA Ⅱ对蚜虫消化液淀粉酶活性的影响

第三章讨论

3.1四棱豆凝集素的分离纯化的方法探讨

3.2四棱豆凝集素对血红细胞凝集的作用机理

3.3蚜虫饲养条件的控制

3.4四棱豆凝集素对蚜虫抗生作用的机理

3.5有待进一步研究的问题

第四章结论

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表论文情况