酒精性肝病创伤弧菌脓毒症大鼠血清MMP-9的变化及意义

摘要

目的： 探讨酒精性肝病创伤弧菌脓毒症大鼠血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的水平及联合应用头孢哌酮钠和左氧氟沙星的干预作用，并观察MMP-9变化与创伤弧菌脓毒症进展的关系。 方法： l、酒精性肝病大鼠模型的构建100只SD雄性大鼠，随机分为酒精灌胃组(90只)及生理盐水灌胃组(10只)。酒精灌胃组大鼠以56％的酒精溶液5g/kg·d连续灌胃10w，10w末从该组大鼠任取两只，活杀后取肝组织送检病理。生理盐水灌胃组大鼠以等体积的生理盐水灌胃。 2、正式实验分组及处理取酒精灌胃组大鼠60只，按随机数字表分为10组，每组6只。1～4组设为肝病脓毒症组(AV组)，5～8组设为抗菌药物干预组(AVA组)，9组设为抗菌药物对照组(AA组)，10组设为肝病对照组(A组)。并从生理盐水灌胃组随机取6只大鼠设为正常对照组(N组)。创伤弧菌经后肢皮下注射感染AV及AVA组大鼠(细菌浓度为6.0×109cfu/ml，剂量为0.5ml/100g)；抗菌药物经两侧腹腔注射(ip)AVA及AA组大鼠，左侧头孢哌酮钠(180mg/kg，每日2次)，右侧乳酸左氧氟沙星(18mg/kg，每日2次)。AV组于染菌后2h，6h，12h，24h处死；AVA组于染菌后4h进行抗菌药物干预，并于染菌后6h，12h，24h，10d处死。AA组注射1次抗菌药物后6h即麻醉处死。A组及N组大鼠直接麻醉后处死。留取各组大鼠标本。 3、观察并详细记录感染创伤弧菌后各组大鼠毒血症状，包括活动度、呼吸频率、有无寒战竖毛、有无发绀、饮食情况、下肢肿胀程度等。 4、常规留取血清标本，以全自动生化仪检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)水平，并以ELISA法测定各组大鼠血清MMP-9水平。 5、留取各组大鼠肝、肺组织，以10％福尔马林液固定，脱水、透明、石蜡包埋、切片、HE染色，光学显微镜观察。 6、实验所得计量资料采用均数士标准差(x±s)表示，应用SPSS10.0进行t检验、方差分析等处理，对等级资料的进行秩和检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。 结果： 1、AV组大鼠染菌后6h开始出现较明显的毒血症状，并随时间的延长加剧，24h达高峰，濒临死亡；AVA组大鼠毒血症状明显轻于AV组，36h后症状基本消失，10d末大鼠均存活。 2、A组大鼠血清ALT、AST均明显高于N组(P＜0.05)；AV组大鼠血清ALT、AST在染菌后2h即开始明显升高，并随时间的延长进行性升高，24h达高峰，以AST为主(与A组比，P＜0.01)：AVA组大鼠血清ALT与AST变化曲线与AV组一致，但其水平明显低于各相同时间点AV组(P＜0.01)。 3、A组大鼠血清MMP-9水平较N组高(P＜0.05)：AV组大鼠血清MMP-9水平在染菌后6h，12h，24h均明显高于A组(P＜0.05)，12h是高峰，24h已明显回降(与12h比，P＜0.001)；AVA组大鼠血清MMP-9变化曲线与AV组一致，各时间点MMP-9水平低于AV组相应时间点，但仅6h点有统计学意义。 4、AV组大鼠染菌后6h见肺泡充血水肿，少许炎细胞浸润，12h损伤加重，到24h可见大量的炎细胞浸润，淋巴滤泡形成，肺泡结构模糊，伴肺泡腔出血。AVA组多数大鼠肺病理改变相对轻于同一时间点的AV组。对各组大鼠肺脏炎症分度进行秩和检验，AV组大鼠染菌后6h，12h，24h肺脏炎症均明显重于N组(P均＜0.05)，且染菌后24h肺脏炎症明显重于染菌后6h及A组(P均＜0.05)。AVA组大鼠染菌后24h肺脏炎症轻于同时间点AV组(P=0.051). 5、A组大鼠肝脏可见轻度脂肪变性。AV组大鼠6h见少许炎细胞浸润，12h炎症细胞浸润增多伴肝细胞水肿，24h见肝细胞水肿明显，汇管区见大量炎细胞浸润。对各组大鼠肝脏炎症分度进行秩和检验，AV组24h肝脏炎症明显重于A组及N组(P均＜0.05)。 结论： l、酒精性肝病创伤弧菌脓毒症大鼠血清MMP-9水平明显高于对照组，在脓毒症早期即可升高，中期达高峰，而脓毒症后期却明显下降。抗菌药物的干预能明显降低脓毒症早期大鼠血清MMP-9的水平。 2、MMP-9参与了酒精性肝病创伤弧菌脓毒症的致病过程，但可能不是脓毒症后期病情加重、脏器损伤的主要参与因素。 3、血清MMP-9水平在脓毒症后期时已明显下降，故不能准确反应酒精性肝病创伤弧菌脓毒症病情轻重及全身器官损伤的程度。

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综述慢性肝病患者并发创伤弧菌脓毒症研究现状