桔苷灵糖浆及其原料药的质量控制与药效学的研究

摘要

桔苷灵糖浆是本研究室以桔梗等中药有效组分为主要原料研发的现代中药新制剂，迄今为止，尚未见有相关报道。本研究以桔梗有效组分为质量控制指标，采用高效液相色谱与蒸发光散射检测器联用的方法与技术，对桔苷灵糖浆及其原料药进行了定性、定量研究，为本制剂及其原料药进一步的研发与应用建立了质量控制的方法与技术。同时对桔苷灵糖浆进行了镇咳、祛痰的研究，为桔苷灵糖浆新中药的开发及临床应用奠定了药效学的基础。 桔苷灵糖浆：1.指纹图谱定性方法与技术样品前处理：桔苷灵糖浆2mL，D101大孔吸附树脂柱(柱床：280mm×14mm)，沈脱溶剂为水．乙醇系统，收集50％乙醇流分，浓缩至干，以甲醇定溶至5mL，即得样品液。色谱条件：Hanban LichrospherC18色谱柱(4.6mm x250mm，5μm)，柱温为35℃；检测器为ELSD，漂移管温度为90℃，雾化温度为50℃，载气流速为1.4SLM，压力为0.40MPa；流动相水一乙腈，梯度洗脱，流速为1.0mL/min。在本色谱条件下，对10批次的桔苷灵糖浆样品进行了测定。结果：①样品各峰基本达到基线分离；②以桔梗皂苷D作为参照峰，归纳了9个共有峰，标准谱各峰相对保留时间为：0.0692(1)、0.5983(2)、0.6181(3)、0.744l(4)、0.9739(5)、1.0000(S)、1.0389(7)、1.1668(8)、1.2118(9)；相对峰面积为：0.1186(1)、0.0424(2)、0.2314(3)、0.1716(4)、0.1691(5)、1.0000(S)、0.2513(7)、0.0381(8)、0.1313(9)，建立了桔苷灵糖浆的标准指纹图谱。以相似度为指标，采用相关系数法和夹角余弦法，对指纹图谱进行了方法学考察，其结果：精密度的相似度≥0.9994、稳定性的相似度>0.9993、重复性的相似度>0.9969。经3批样品验证，其色谱图与标准指纹图谱的相似度均≥0.9399，表明，所建立的指纹图谱可信度高，可用于桔苷灵糖浆的质量控制。2.多指标体系的定量方法与技术样品前处理方法及其色谱条件同1，以桔梗皂苷D为标准品建立了以8种主要成分为质量控制指标的含量测定方法。对本方法进行了方法学考察，其结果：线性方程Y=1.4258X-12.449(r=0.9996)，线性范围为3.96μg～19.8μg，精密度RSD=1.95％，稳定性RSD=1.15％，重复性RSD=2.47％，添加回收率平均为94.00％，RSD=2.36％。桔苷灵糖浆样品主要有效组分的平均含量为1.3633 mg/mL，RSD=6.47％。本方法灵敏、准确、重复性好、回收率高、操作简便。原料药：1.指纹图谱定性方法与技术样品前处理：原料药10mg，精密称定，以甲醇定溶至5mL，即得样品液。色谱条件：同前。在本色谱条件下，对10批次的原料药样品进行了测定。结果：①样品各峰基本达到基线分离；②以桔梗皂苷D作为参照峰，归纳了8个共有峰，标准谱各峰相对保留时间为：0.5988(1)、0.6128(2)、0.7448(3)、0.9732(4)、1.0000(S) 1.0391(6)、1.1701(7)、1.2153(8)；相对峰面积为：0.1425(1)、0.4004(2)、0.1783(3)、0.1406(4)、0.0000(S)、0.4296(6)、0.0985(7)、0.3361(8)，建立了原料药的标准指纹图谱。以相似_度为指标，采用相关系数法和夹角余弦法，对指纹图谱进行了方法学考察，其结果：精密度的相似度≥0.9998、稳定性的相似度≥0.9987、重复性的相似度≥0.9640。经3批样品验证，其色谱图与标准指纹图谱的相似度均≥0.9763，表明，所建立的指纹图谱可信度高，可用于原料药的质量控制。2.多指标体系的定量方法与技术样品前处理方法及其色谱条件同1，以桔梗皂苷D为标准品建立了以8种主要成分为质量控制指标的含量测定方法。对本方法进行了方法学考察，其结果：线性方程Y=1.5486X-12.073(r=0.9990)，线性范围为3.96gg～19.8gg，精密度RSD=1.95％，稳定性RSD=2.47％，重复性RSD=2.44％，添加回收率平均为97.33％，RSD=2.59％。桔苷灵糖浆样品主要有效组分的平均含量为38.42％，RSD=3.33％。本方法灵敏、准确、重复性好、回收率高、操作简便，可用于原料药的质量控制。桔梗饮片：样品前处理：对提取溶剂、提取温度、提取次数和精制方法考察，确定前处理方法：精密称取桔梗粉末0.5g，石油醚脱脂，甲醇超声提取4次(提取温度65℃)，合并提取液，浓缩至干后加5mL水溶解，过滤，滤液行D101大孔吸附树脂柱(柱床：280mm×14mm)，洗脱溶剂为水．乙醇系统，梯度洗脱，收集50％乙醇流分，浓缩至干，以甲醇定溶至5mL，即得样品液。色谱条件：同前。以桔梗皂苷D为标准品建立了以8种主要成分为质量控制指标的含量测定方法。对本方法进行了方法学考察，其结果：线性方程Y=1.2706X-11.947(r=0.9991)，线性范围为4.1681xg～20.84gg，精密度RSD=0.958％，稳定性RSD=1.33％，重复性RSD=2.98％，添加回收率平均为95.60％，RSD=1.91％。桔苷灵糖浆样品主要有效组分的平均含量为0.8005％，RSD=2.02％。本方法灵敏、准确、重复性好、回收率高、操作简便，可用于桔梗饮片的质量控制。桔苷灵糖浆药效学：采用氨水诱发小鼠咳嗽法和大鼠毛细管祛痰法研究桔苷灵糖浆的镇咳和祛痰作用。实验结果：①氨水诱发小鼠咳嗽法，桔苷灵糖浆高、中、低剂量组潜伏期分别为50.08±12.61s、37.77±7.69s、31.00±5.85s，与正常组比较(26.08±8.68s)均能使小鼠咳嗽潜伏期延长，其中高、中剂量组差异有极显著性(P<0.01)，两者镇咳率分别达到92.02％和44.82％，低剂量组无差异，镇咳率为18.87％；与磷酸可待因组(43.25±11.60s)比较，高剂量组和中剂量组均无差异、低剂量组差异有极显著性(P<0.01)。②大鼠毛细管祛痰法，桔苷灵糖浆高、中、低剂量组排痰量分别为：15.80±1.36cm、13.18±1.48cm、11.75±0.46cm，与生理盐水组(10.12±1.54cm)比较均能使大鼠120min内排痰量明显增加，其中高、中剂量组差异有极显著性(P<0.01)，低剂量组无差异；与氯化铵组(15.17±1.14cm)比较，高剂量组和中剂量组无差异、低剂量组差异有极显著性(P<0.01)。上述结果表明桔苷灵糖浆具有镇咳、祛痰的作用，有开发研究价值。 桔苷灵糖浆是-正在研发中的现代中药新制剂，本文的相关研究均属首次，其成果具有创新性和重要的理论意义及实际应用价值。

目录

声明

前言

第一章综述

第二章桔苷灵糖浆的质量控制的研究

1实验仪器、材料与试剂

2实验方法与结果

2.1色谱条件的优化

2.2检测器参数的设置

2.3桔苷灵糖浆指纹图谱的研究

2.4桔苷灵糖浆中桔梗有效组分的含量测定

3小结与讨论

第三章原料药的质量控制的研究

1实验仪器、材料与试剂

2实验方法与结果

2.1原料药指纹图谱的研究

2.2原料药中桔梗有效组分的含量测定

3小结与讨论

第四章桔梗饮片的质量控制的研究

1实验仪器、材料与试剂

2实验方法与结果

2.1桔梗饮片中桔梗有效组分的含量测定

3小结与讨论

第五章桔苷灵糖浆的药效学研究

1实验材料

2实验方法

2.1桔苷灵糖浆镇咳作用的研究

2.2桔苷灵糖浆化痰作用的研究(大鼠毛细玻管法)

2.3统计学处理方法

3实验结果与分析

3.1桔苷灵糖浆镇咳作用

3.2桔苷灵糖浆化痰作用(大鼠毛细玻管法)

4小结与讨论

结论

参考文献

附录

致谢