声明
摘要
缩略词
第一章前言
1 PEDV概述
1．1 PEDV蛋白功能
2 PEDV疫苗的研究进展
2．1传统PEDV疫苗
2．2 PEDV新型疫苗
3杆状病毒表面展示系统
4生物素-亲和素系统
1研究目的与意义
2研究内容
3技术路线
1引言
2材料与方法
2．1实验材料与仪器
2．2引物设计与合成
2．3生物素化重组载体的构建
2．4克隆S1基因的转移载体构建
2．5 gp64-BAP283基因的克隆与重组载体构建
2．6 Bac-to-Bac构建重组RD-AcBacmid
2．7 Sf9细胞的冻存、复苏以及培养
2．8重组杆状病毒的产生及鉴定
3结果与分析
3．1 目的基因的扩增及鉴定
3．2重组载体的PCR及双酶切鉴定
3．3重组载体质粒捌序鉴定
3．4重组RD-AcBacmid鉴定
3．5细胞内同源重组构建重组杆状病毒
3．6重组S1表达分析
3．7重组蛋白S1-eGFP表达时相以及病毒增殖分析
4讨论
1引言
2材料与方法
2．1实验材料、试剂与仪器
2．2目的蛋白S1及S1-eGFP的细胞定位
2．3目的蛋白S1重组病毒表面定位
3结果
3．1直接荧光观察
3．2间接免疫荧光观察
3．3免疫电镜观察
4讨论
第五章磁珠纯化重组病毒以及PEDV-1病毒扩增
1引言
2材料与方法
2．1实验材料、试剂与仪器
2．2生物素化重组病毒
2．3磁珠吸附生物素化重组病毒
2．4磁珠纯化病毒的效果测定
2．5 Vero细胞的复苏、培养及冻存
2．6 PEDV-1的扩增
3结果
3．1银染检测磁珠纯化的重组病毒及S1-eGFP的Western blot分析
3．2荧光定量PCR检测纯化重组病毒拷贝数
3．3 PEDV-1毒株的扩增
4讨论
第六章大鼠怀孕模型建立以及重组病毒免疫原性研究
1引言
2材料与方法
2．1实验材料、试剂与仪器
2．2免疫原制备
2．3大鼠怀孕模型的建立
2．4免疫大鼠
2．6免疫大鼠总sIgA测定
3．1免疫大鼠PEDVS1特异性IgG测定
3．2免疫大鼠总sIgA测定
3．3免疫大鼠PEDV S1特异性sIgA测定
4讨论
结果
总结与展望
参考文献
致谢
