基础研究 免疫瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白对SD大鼠脂肪沉积的影响

摘要

目的原核表达瘦素受体（OBR）近跨膜区重组融合蛋白并进行SD大鼠免疫实验，观察其对SD大鼠脂肪沉积的影响。方法设计1对带有BamHI和Hindlll酶切位点特异性引物，扩增OBR胞外近跨膜区基因片段（1705～2364bp），经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamHI和HindⅢ两酶切位点之间，构建OBR胞外近跨膜区重组表达质粒并在大肠杆菌E．coli BL21（DE3）中表达，SDS．PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物。随后制备OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白并免疫SD大鼠，观察其对SD大鼠体质量、采食量、体长、Lee’S指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积、皮下脂肪沉积的影响。结果SDS．PAGE电泳分析和Western blotting鉴定结果显示，在IPTG诱导下OBR胞外近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量27600左右的融合蛋白。对SD大鼠免疫0BR胞外近跨膜区重组融合蛋白后，体质量、体长、Lee’S指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积与对照组无明显差异，而采食量显著增加、皮下脂肪细胞体积减小。结论成功表达西藏小型猪瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白，免疫SD大鼠可促进采食和抑制皮下脂肪沉积。