宫内缺氧对幼年大鼠海马CA3区神经元与学习记忆能力的影响机制

摘要

目的:探讨宫内缺氧幼年大鼠海马CA3区乙酰胆碱酯酶(AChE)、突触体素(SYN)和Jmjd6(Jumonji C domain containing gene6)的表达变化,从而研究宫内缺氧对幼年大鼠海马CA3区神经元与学习记忆能力的影响机制。
　　 方法:健康SD孕鼠14只,随机分为对照组和缺氧组,分别6只和8只。于孕14 d开始将缺氧组的孕鼠置于三气培养箱(氧浓度:130 mL／L,二氧化碳浓度:0.3 mL／L-0.4 mL／L,温度:25℃,相对湿度:75％-80％)中缺氧2 h／d,连续缺氧5 d(孕14 d-18 d),制作胎鼠宫内缺氧模型,对照组不做缺氧处理。产后两组每窝随机选取新生鼠2只饲养至30 d(30日龄)(为平衡每窝新生鼠数量,其余处死),进行为期11 d的Morris水迷宫测试,记录探查训练时幼鼠在目标象限的搜索时间(T1)和对位探查训练时幼鼠在目标象限的搜索时间(T2)。水迷宫测试结束当日,经40 g／L甲醛灌注固定、取脑组织,脱水、浸蜡、石蜡包埋、切片(经海马,片厚5 um),行AChE、SYN及Jmjd6免疫组织化学染色。AChE抗体稀释度为1:200,SYN抗体稀释度为1:150,Jmjd6抗体稀释度为1:80。本实验免疫组化的主要操作步骤:①脱蜡、水化组织切片。②根据所应用一抗的特殊要求,对组织切片进行预处理。③3％H2O2去离子水孵育10 min,阻断内源性过氧化物酶。PBS冲洗,2 min×3次。④滴加一抗,4℃冰箱过夜,PBS冲洗,2 min×3次。⑤按照一抗的来源,分别滴加相应的检测试剂,37℃孵育30min,PBS冲洗,2 min×3次。⑥:DAB避光显色5-10 min(显微镜下控制显色时间)。⑦蒸馏水充分冲洗。⑧切片常规脱水、透明、封片。每张切片在400倍下用网络版数码显微镜DMBA200对海马CA3区拍照。IPP6-0软.件图像分析,记录各免疫组化阳性细胞的积分光密度(integral opticaldensity,IOD)值。统计学分析:两组之间比较用独立样本t检验。
　　 结果:Morris水迷宫实验显示缺氧组幼年大鼠探查测试时间(T1=18.47±4.41 s)较对照组幼年大鼠探查测试时间(T1=24.38±4.89 s)明显缩短,并且缺氧组幼年大鼠对位探查测试时间(T2=15.38±6.10 s)较对照组幼年大鼠对位探查测试时间(T2=22.04±5.57 s)亦明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果分别比较对照组和缺氧组AChE、SYN和Jmjd6阳性细胞的IOD值:缺氧组AChE阳性细胞的IOD值均数(12.09±1.93)比对照组均数(10.36±1.42)大,且差异有统计学意义(P<0.05):缺氧组SYN阳性细胞的IOD值均数(12.51±2.65)比对照组均数(17.63±2.53)小,且差异有统计学意义(P<0.05)；缺氧组Jmjd6阳性细胞的IOD值均数(7.99±1.75)比对照组均数(6.24±0.52)大,且差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 结论:一定时间(2 h／d,连续5 d)、一定浓度(氧浓度:130 mL／L)的宫内缺氧可以导致幼年大鼠学习记忆能力降低,其机制可能与缺氧导致幼年大鼠海马CA3区AChE含量增多(乙酰胆碱含量相对降低)、SYN含量降低、表达减少及Jmjd6功能减弱有关。

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缺氧损伤神经元的调节与保护(综述)

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