Wnt家族成员在TA2小鼠乳腺癌发生过程中表达变化规律及sunitinib对TA2小鼠乳腺癌治疗疗效的初步研究

摘要

研究目的：
　　 1.收集TA2自发乳腺癌小鼠，观察其成瘤特点。
　　 2.探讨Wnt家族成员中Wnt1、Wnt10b、Wnt5a及Wnt5b在TA2小鼠乳腺癌发生过程中表达变化规律。
　　 3.在高转移TA2小鼠自发乳腺癌移植瘤模型中观察舒尼替尼对TA2小鼠自发乳腺癌的治疗效果。希望为人类三阴乳腺癌临床治疗提供新手段。
　　 研究方法：
　　 1.收集TA2自发乳腺癌小鼠42只，记录其详绌资料，包括出生日期，孕产次数，见瘤日期，处死并进行病理学鉴定。
　　 2.选取TA2小鼠自发乳腺癌组织及对侧未发瘤的乳腺组织（癌前病变），正常乳腺组织，处于孕早、中、晚各个时期TA2小鼠的乳腺组织，及经产TA2小鼠的乳腺组织，用real time PCR技术检测TA2小鼠乳腺癌发生过程中Wnt家族成员表达变化规律。
　　 3.选择6周龄的TA2雌鼠，建立高转移TA2小鼠自发乳腺癌移植瘤模型，待瘤体积达到0.2cm3，按瘤体体积大小分为两组，对照组给灭菌的去离子水，实验组给予抗肿瘤药物舒尼替尼(sunitinib)，隔天测量瘤体体积，用药1周后，处死小鼠，收集移植瘤、内脏和股骨称重，4％福尔马林固定。根据瘤体积绘制肿瘤生长曲线，IHC检测给药组与对照组组织内细胞增殖标志物PCNA和血管标志物endomucin表达，观察抗肿瘤药物舒尼替尼对肿瘤的影响。
　　 研究结果：
　　 1.本研究所收集的42只TA2自发乳腺癌小鼠，均为经产鼠。平均见瘤年龄为(336.706±85.05)天。平均分娩次数(3.767±1.79)次，其中分娩次数超过3次（包括3次）的荷瘤鼠占71.42％，分娩次数达7次为最多者，其平均见瘤年龄仅为251.5天，远远低于平均见瘤年龄。
　　 2.Real time PCR结果显示，妊娠期间，Wnt1相对表达水平逐渐升高，产后相对表达水平高于正常;Wnt10b在妊娠早期相对表达水平升高，中期有所下降，妊娠后期又重新升高，产后有所降低，但仍高于正常水平;Wnt5a相对表达水平在妊娠期逐渐下降，产后低于正常水平。Wnt5b相对表达水平在妊娠过程中先升高后下降，产后，Wnt5b表达水平也高于正常。在TA2小鼠乳腺癌生成过程中，Wnt1、Wnt10b、Wnt5a在癌前病变和乳腺癌组织中表达水平高于正常乳腺组织，而Wnt5b在乳腺癌组织中表达低于正常乳腺组织。
　　 3.药物实验结果显示实验组肿瘤生长速度显著低于对照组;此外，实验组乳腺癌移植瘤在肺、肝、脾、肾和腹腔转移率显著低于对照组;癌组织内坏死面积较大，PCNA阳性癌细胞数目显著低于对照组;与对照组相比，实验组MVD降低。
　　 结论：
　　 1.本研究对42只自发乳腺癌TA2小鼠资料进行统计学分析发现，妊娠次数越多，乳腺癌发生的可能性越大，成瘤时间越短，与前期研究结果一致。
　　 2.Wnt1、Wnt5a、Wmt10b可能在TA2小鼠乳腺癌发生过程中起促进作用;妊娠期妊娠期雌、孕激素水平升高后，可能通过诱导MMTV转录，进而促进Wnt1和Wnt10b的活化。
　　 3.抗肿瘤药舒尼替尼能明显抑制TA2自发乳腺癌生长和转移，提示舒尼替尼有希望成为治疗三阴乳腺癌的特异性药物。