谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的转运特点和对空肠发育影响的研究

摘要

为研究丙氨酰谷氨酰胺二肽(Alanylglutaminedipeptide,Ala-Gln)和甘氨酰谷氨酰胺二肽(Glycylglutaminedipeptide,Gly-Gln)在断奶仔猪肠道中的降解、吸收特点和两种二肽对断奶仔猪肠道发育的影响，本研究进行了以下三个试验：
　　 试验一：谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的水解
　　 本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠中的水解特点。试验采用体外培养断奶仔猪外翻肠段的方法，将培养液分三个处理（空白对照组、Ala-Gln二肽组和Gly-Gln二肽组），每个处理三个重复，每个重复一个肠段，37℃恒温孵育60min，每5min取样一次，通过检测培养液中完整二肽的含量来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在空肠中的水解情况。结果如下：在孵育60min后，培养液中Ala-Gln二肽含量为9.00±1.57mmol/L,Gly-Gln二肽含量为8.85±1.78mmol/L，两种二肽浓度差异不显著(P＞0.05)；孵育60min后，Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽的降解速率分别是0.17±0.03mmol/L/min、0.19±0.03mmol/L/min，两者之间差异不显著(P＞0.05)。结果表明：60min内Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪肠段培养液中的含量均随着时间的延长逐渐降低,但并未完全降解，本试验为进一步研究这两种小肽的完整吸收提供了依据。
　　 试验二：谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠中的吸收特点
　　 本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠中的吸收特点。试验采用外翻肠囊的方法，将培养液分五个处理，即空白对照组、Ala-Gln二肽组、游离Ala+Gln组、Gly-Gln二肽组和游离Gly+Gln组，每个处理三个重复，每个重复一个外翻肠囊，37℃恒温孵育40min后取样，通过检测培养液、浆膜液和组织匀浆液中完整二肽和单体谷氨酰胺的含量，来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在小肠中的吸收情况。结果如下：Ala-Gln的吸收量和吸收速率分别是10.26±0.74mmol/L、0.26±0.02mmol/L/min，显著高于Gly-Gln吸收量和吸收速率(分别是7.25±1.47mmol/L、0.18±0.04mmol/L/min)(P＜0.05);Gly-Gln二肽吸收量（速率）高于Gly+Gln处理的中Gln吸收量（速率），Ala-Gln二肽吸收量（速率）显著高于Ala+Gln处理中Gln吸收量（速率）(P＜0.05)；游离Ala+Gln处理中Gln吸收量和转运速率分别是7.28±0.54mmol/L和0.18±0.01mmol/L/min，均高于Gly+Gln处理中Gln吸收量和吸收速率(P＜0.05),分别是4.79±0.54mmol/L和0.12±0.01mmol/L/min。以上结果表明，Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽均能以完整形式被迅速吸收；Ala-Gln二肽吸收速率高于Gly-Gln二肽吸收速率，高于游离谷氨酰胺吸收速率。
　　 试验三：谷氨酰胺二肽对断奶仔猪空肠发育的影响
　　 本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽对断奶仔猪空肠发育的影响。采用体外培养肠组织的方法，将培养液分为三个试验组：空白对照组、Ala-Gln组和Gly-Gln二肽组；两个二肽组分别包括2mmol/L、4mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L相应二肽处理，将组织置于二氧化碳培养箱中，95％O237℃恒温培养48h～96h，通过检测培养液中乳酸脱氢酶的活性、肠组织蛋白含量、谷氨酰胺酶和二胺氧化酶活力、BrdU掺入细胞核的情况、Caspase-3表达情况，来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽对肠组织中谷氨酰胺代谢、细胞增殖和凋亡的影响。结果显示：与空白对照组相比，添加Ala-Gln二肽或Gly-Gln二肽后能降低培养液中乳酸脱氢酶活力；能显著提高断奶仔猪空肠组织蛋白含量(P＜0.05)、谷氨酰胺酶活力(P＜0，05)和二胺氧化酶活力(P＜0.05)，且随着二肽浓度提高而逐渐增加，当Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽浓度分别为20mmol/L、30mmol/L时，空肠组织蛋白含量和二胺氧化酶活力最高，当两种二肽浓度均为20mmol/L时，空肠组织谷氨酰胺酶活力最高；Ala-Gln二肽和Gly-G1n二肽都能显著提高BrdU掺入细胞核的阳性细胞百分比(P＜0.01)、增加BrdU免疫阳性细胞的平均光密度(P＜0.01)，均随着二肽浓度提高而逐渐增加，当两种二肽浓度均为30mmol/L时效果最佳；Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽都能显著降低肠组织Caspase-3免疫阳性细胞百分比(P＜0.01)和Caspase-3免疫阳性细胞平均光密度(P＜0.01)，随着二肽浓度增加而逐渐降低；两种二肽浓度在20mmol/L与30mmol/L时，作用效果差异不显著(P＞0.05)。结果表明，Ala-Gln二肽、Gly-Gln二肽通过提高肠组织谷氨酰胺代谢酶活力而加强组织对Gln利用，从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高空肠组织蛋白含量。谷氨酰胺二肽作用效果随其浓度提高而呈剂量依赖效应，且相同浓度的两种二肽作用效果基本一致。当两种二肽浓度均为20mmol/L时，空肠组织谷氨酰胺酶活力最高；当Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽浓度分别是20mmol/L、30mmol/L时，空肠组织蛋白含量和二胺氧化酶活力最高；当两种二肽浓度为30mmol/L时，其促进空肠细胞增殖，抑制细胞凋亡效果最佳。
　　 综上所述，Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠培养液中培养60min后并不完全被降解，其降解速率分别是0.17±0.03mmol/L/min,0.19±0.03mmol/L/min。40min内，Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽能以完整形式被吸收，吸收量分别是10.26±0.74mmol/L和7.25±1.47mmol/L;Ala-Gln二肽吸收速率高于Gly-Gln二肽，高于游离谷氨酰胺吸收速率。Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽通过提高空肠组织谷氨酰胺酶活力和二胺氧化酶活力，加强细胞对谷氨酰胺的利用强度，从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高组织蛋白含量，最终起到保护细胞完整性的作用。两种肽作用效果均随二肽浓度提高而呈剂量依赖效应，且相同浓度的两种二肽作用效果基本一致。

目录

文摘

英文文摘

项目基金资助

中英文索引

一、前言

二、文献综述

1．谷氨酰胺二肽的理化性质

2．谷氨酰胺二肽的吸收和利用特占

2.1 谷氨酰胺二肽的吸收

2.2 谷氨酰胺二肽的利用特占

3．谷氨酰胺二肽对肠道发育的影响

4．谷氨酰胺二肽的抗分解／蛋白同化作用、免疫调节作用和抗氧化作用

5．谷氨酰胺二肽对断奶仔猪生产性能的影响

三、有待研究的问题及本研究的内容、目的和意义

1．研究中存在的问题

2．研究目的、内容和意义

3．技术路线

四、试验研究

实验一、谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的水解

1.材料和方

2．结果与分析

3．讨论

4．小结

试验二、谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠中的吸收特占

1．材料和方法

2．结果与分析

3．讨论

4．小结

试验三、谷氨酰胺二肽对断奶仔猪空肠发育的影响

1．材料和方法

2．结果与分析

3．讨论

4．小结

五、总体讨论

1．谷氨酰胺二肽在空肠的水解和吸收

2．谷氨酰胺二肽对空肠发育的影响

六、结论

参考文献

致谢

攻读硕士研究生期间发表文章