氯化镍对雏鸡脾脏免疫功能影响的研究

摘要

本研究选用1日龄艾维茵肉鸡(AA)健雏240只，随机分成4组，分别饲以对照日粮和高镍日粮（高镍Ⅰ组:300 mg/kg，高镍Ⅱ组:600 mg/kg，高镍Ⅲ组:900 mg/kg，镍源:氯化镍，NiCl2），自由饮水，饲喂42天。采样时间为14，28和42日龄。以实验病理学、TUNEL、流式细胞术、荧光定量PCR和ELISA等方法研究日粮中添加不同水平氯化镍对雏鸡脾脏免疫功能的影响。结果如下:
　　1.与对照组比较，高镍组雏鸡体重增长减慢，脾脏体积减小、重量减轻。白髓中淋巴细胞数量减少;超微结构观察可见内质网扩张和核膜扩张，凋亡细胞增多。
　　2.脾脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著降低(P＜0.05或P＜0.01)，谷胱甘肽(GSH)含量显著降低(P＜0.05或P＜0.01)，丙二醛(MDA)含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，抑制羟自由基能力下降(P＜0.05或P＜0.01)。
　　3.TUNEL染色结果与流式结果显示，脾脏淋巴细胞凋亡数量和凋亡率显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达水平和含量显著下降(P＜0.05或P＜0.01)。
　　4.流式细胞术检测结果显示，CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞百分率不同程度下降，CD4+/CD8+比例降低。IgA+B细胞数量显著减少(P＜0.05或P＜0.01)。
　　5.脾脏白细胞介素（interleukin IL，IL-2、IL-6、IL-10、IL-12），肿瘤坏死因子α(Tumornecrosis factor，TNF-α/LITAF)，干扰素γ(Interferon，IFN-γ) mRNA表达水平和含量均显著下降(P＜0.05或P＜0.01)，免疫球蛋白(immunoglobulin Ig，IgA、IgG、IgM)含量显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。
　　6.实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction)结果表明:Toll样受体（Toll-like receptor TLR，TLR4和TLR7）的基因表达水平均显著下调(P＜0.05或P＜0.01)。
　　研究结果表明日粮中氯化镍超过300 mg/kg时脾脏会发生以下变化:①SOD、CAT、GSH-Px活性下降，GSH含量减少，抑制羟自由基能力下降，MDA含量显著上升，引起脾脏氧化损伤;②镍的摄入引起脾脏淋巴细胞膜结构受损，凋亡细胞增多，造成脾脏的生长发育和免疫功能受损;③细胞因子(IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α/LITAF、IFN-γ) mRNA表达下调、含量降低，CD4+和CD8+T淋巴细胞比例下降，表明T淋巴细胞数量减少和功能受损，细胞免疫功能受到抑制;④IgA+B细胞数量减少及IgA、IgG、IgM含量降低，表明B淋巴细胞和体液免疫功能受损;⑤TLR4和TLR7 mRNA表达下调，表明脾脏非特异性免疫受到影响。

目录

声明

论文说明

摘要

缩写词表(Abbreviations)

1．文献综述

1．1 镍的理化性质

1．2 体内镍的含量及代谢

1．3 镍对机体的影响

1．3．1 镍影响机体的机制

1．3．2 对生长发育的影响

1．3．3 对造血和心血管的影响

1．3．4 对生殖的影响

1．3．5 对内分泌的影响

1．3．6 镍对免疫的影响

1．4 镍中毒

1．4．1 镍的毒性及机制

1．4．2 镍的致癌性与机制

1．5 镍的研究展望

2．研究目的及意义

3．材料与方法

3．1 试验材料

3．1．1 试验动物与日粮

3．1．2 主要仪器和试剂

3．2 试验方法

3．2．1 动物分组及饲养管理

3．2．2 临床观察

3．2．3 病理学观察

3．2．4 细胞凋亡检测

3．2．5 T淋巴细胞亚群和细胞因子检测

3．2．6 Toll样受体的mRNA表达

3．2．7 IgA+B细胞和免疫球蛋白检测

3．2．8 主要抗氧化指标检测

3．2．9 石墨炉原子吸收法检测镍含量

3．3 数据处理

4 结果

4．1 临床观察

4．2 脾脏的绝对重量及脏器指数

4．2．1 脾脏的绝对重量

4．2．2 脾脏的脏器指数

4．3 病理学观察

4．3．1 剖检变化

4．3．2 组织学变化

4．3．3 超微结构变化

4．4 脾脏细胞凋亡

4．4．1 细胞凋亡百分率变化

4．4．2 Bax，Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达变化

4．4．3 Bax，Bcl-2和Caspase-3蛋白水平变化

4．5 脾脏T淋巴细胞亚群变化

4．6 脾脏中细胞因子mRNA表达及含量变化

4．6．1 细胞因子mRNA表达水平变化

4．6．2 细胞因子含量变化

4．7 脾脏中TLR4和TLR7 mRNA表达水平变化

4．7．1 TLR4 mRNA表达水平变化

4．7．2 TLR7 mRNA表达水平变化

4．8 脾脏中IgA+B细胞数量及IgA、IgG和IgM含量变化

4．8．1 IgA+B细胞数量变化

4．8．2 IgA、IgG和IgM含量变化

4．9 脾脏中主要抗氧化指标的变化

4．9．1 SOD活性变化

4．9．2 CAT活性变化

4．9．3 GSH-Px活性变化

4．9．4 组织抑制羟自由基能力变化

4．9．5 GSH含量变化

4．9．6 MDA含量变化

4．10 脾脏镍含量

5．讨论

5．1 临床症状

5．2 氯化镍对脾脏形态结构的影响

5．3 氯化镍对脾脏氧化损伤和脾细胞凋亡的影响

5．4 氯化镍对脾脏T、B淋巴细胞及其产物的影响

5．5 氯化镍对脾脏Toll样受体的影响

6 结论与创新

6．1 结论

6．2 创新

参考文献

图版及说明

致谢

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