齿瓣石斛多糖提取工艺及抗氧化活性研究

摘要

如今，现代园林在观赏游憩的基础上，更加注重其生态功能，为周围小环境的改善发挥了重要作用，同时，维护公共健康也成为园林所担负的重要责任。作为构建养生保健型园林的基础，将具有保健作用的药用园林植物引入现代园林成为了时尚。本研究就是基于此，对药用园林植物中众多种类中的一种——齿瓣石斛(Dendrobium devonianumPaxt.)进行深入探究，目的是使其在充分保证园林生态功能和美化功能的前提下，为进一步开发其医疗保健功能提供科学依据和理论指导。齿瓣石斛作为石斛属的一种，对其研究还大多在栽培种植上，对于其自身代谢产物的研究还是空白，因此，对齿瓣石斛多糖的酶提取工艺研究和抗氧化活性研究具有重要的意义。
　　本实验首先对齿瓣石斛多糖的酶提法进行了工艺优化，通过单因素实验确定对其提取率影响最大的三个因素为酶量浓度、酶解温度和pH。然后通过Box-Behnken响应面实验对其提取工艺进行优化，优化后的最佳提取条件为:酶量浓度0.94％，酶解温度51.06℃，pH=4.94。在该条件下，预测的齿瓣石斛多糖提取率为157.93 mg/g。经3次验证实验，测得其平均提取率为157.58 mg/g，与预测值基本吻合。
　　然后根据提取工艺的方法，对齿瓣石斛多糖进行提取。将提取液用sevage试剂去蛋白，检测其在280 nm处的紫外吸收峰判断溶液中是否还含有蛋白质。去蛋白后，将多糖提取液反复醇沉以去除色素，直到提取液颜色接近无色时，分别在乙醇浓度为40％、60％和80％下醇沉出三种不同分子量的多糖，并将其命名为40％多糖、60％多糖和80％多糖。将三种多糖用丙酮和乙酸乙酯洗涤以去除有机杂质后，再次溶解，置于透析袋中透析以去除小分子杂质。最后将透析后的多糖溶液减压干燥，得到固体多糖。
　　最后将三种多糖进行体外抗氧化活性的测定。结果显示，通过酶提法提取出来的齿瓣石斛多糖抗氧化活性很低。40％多糖、60％多糖和80％多糖的糖醛酸含量分别仅为3.05％、2.96％和2.98％，硫酸根含量分别仅为0、0.70％和0。判定还原性大小的还原值仅分别为0.051、0.011和0.021，对超氧自由基的清除率分别为5.63％、9.22％、5.63％，对DPPH自由基的清除率分别为0、0和1.43％，对ABTS自由基的清除率分别为0.37％、0.03％和14.86％，对羟自由基的清除率分别为27.54％、0.70％和0。

目录

声明

摘要

1 文献综述

1．1 药用园林植物

1．1．1 药用园林植物的概念定义

1．1．2 药用园林植物的应用历史

1．1．3 药用园林植物的应用优势

1．1．4 药用园林植物的研究意义

1．2 齿瓣石斛

1．2．1 石斛的基本概况

1．2．2 齿瓣石斛的研究现状

1．3 多糖

1．3．1 多糖的提取方法

1．3．2 多糖的生物活性

2 研究意义和实验内容

2．1 研究意义

2．2 实验内容

3 齿瓣石斛多糖酶提取工艺优化

3．1 实验材料、试剂及设备

3．1．1 材料

3．1．2 试剂及设备

3．2 实验方法

3．2．1 齿瓣石斛多糖的提取方法

3．2．2 多糖含量测定标准曲线的绘制

3．2．3 单因素实验

3．2．4 BBD响应面实验

3．3 实验结果

3．3．1 单因素实验

3．3．2 BBD实验结果

3．4 小结与讨论

4 多糖的提取、分离及纯化

4．1 实验材料、试剂及设备

4．1．1 材料

4．1．2 试剂及设备

4．2 实验方法

4．3 实验结果

4．4 小结与讨论

5 体外抗氧化活性测定

5．1 实验材料、试剂及设备

5．1．1 材料

5．1．2 试剂及设备

5．2 实验方法

5．2．1 糖醛酸含量测定

5．2．2 硫酸糖含量测定

5．2．3 多糖样品液的配制

5．2．4 还原性的测定

5．2．5 清除超氧自由基

5．2．6 清除DPPH自由基

5．2．7 清除ABTS自由基

5．2．8 清除羟自由基

5．3 实验结果

5．3．1 糖醛酸测定结果

5．3．2 硫酸糖含量测定

5．3．3 还原性测定

5．3．4 清除超氧自由基

5．3．5 清除DPPH自由基

5．3．6 清除ABTS自由基

5．3．7 清除羟自由基

5．4 小结与讨论

6 结论

7 展望

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文及参与项目