汉黄芩素对人宫颈癌细胞PNI相关RET、pRET、GDNFR-α1和CX3CR1蛋白表达的作用研究

摘要

目的：
　　本实验通过研究汉黄芩素对人宫颈癌细胞（Hela、CaSki、C33A）PNI相关蛋白RET、pRET、GDNFR-α1和CX3CR1表达的影响，旨在探讨汉黄芩素对人宫颈癌PNI的作用，以期为宫颈癌的药物治疗提供新的思考方向。
　　方法：
　　1.结晶紫法筛选汉黄芩素的浓度区间，测定汉黄芩素诱导人宫颈癌细胞（Hela、CaSki、C33A）后细胞的存活率。
　　2.划痕实验评估汉黄芩素诱导Hela、CaSki、C33A细胞12、24、48小时后细胞迁移情况；
　　3.Western Blot测定经不同浓度汉黄芩素分别诱导Hela、CaSki、C33A细胞6、24小时后RET、pRET、GDNFR-α1和CX3CR1的表达水平。
　　结果：
　　1．汉黄芩素以剂量依赖方式抑制人宫颈癌细胞Hela、CaSki、C33A的生长，Hela、CaSki、C33A细胞株的IC50分别为(85.65±0.48505)μmol/L，(91.32±0.26963)μmol/L和(96.30±0.37242)μmol/L，其中Hela细胞株的IC50值最小，说明汉黄芩素对Hela细胞的抑制作用最明显，CaSki次之，C33A最弱(P<0.05)。
　　2．汉黄芩素可抑制人宫颈癌细胞Hela、CaSki、C33A的迁移(P<0.05)；与对照组相比，汉黄芩素诱导Hela、CaSki细胞12h，24h，48h后迁移距离明显变小（P<0.05），汉黄芩素诱导C33A细胞12h后迁移距离差异无统计学意义（P>0.05），诱导24h，48h后迁移距离明显变小（P<0.05）。
　　3．汉黄芩素可抑制人宫颈癌Hela、CaSki、C33A细胞RET，pRET，GDNFR-α1和CX3CR1的表达（P<0.05）；汉黄芩素对Hela细胞GDNFR-α1的表达抑制作用呈剂量依赖（P<0.05）、对C33A细胞GDNFR-α1的表达抑制作用呈时间依赖（P<0.05）、对C33A细胞pRET的表达抑制作用呈剂量及时间依赖（P<0.05）。
　　结论：
　　1．汉黄芩素可抑制人宫颈癌细胞（Hela、CaSki、C33A）的生长，抑制作用呈剂量依赖。
　　2．汉黄芩素可以抑制人宫颈癌细胞（Hela、CaSki、C33A）的迁移；
　　3．汉黄芩素可抑制人宫颈癌细胞（Hela、CaSki、C33A）RET，pRET，GDNFR-α1和CX3CR1的表达；
　　4．汉黄芩素可能通过抑制GDNF-RET信号传导和CX3CR1的表达来抑制宫颈癌PNI的发生。

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引言

2.1 材料

2.1.1实验细胞

2.1.2实验试剂

2.1.3 主要实验仪器与设备

2.1.4主要实验耗材

2.1.5主要溶液配制

2.2 方法及技术路线

2.2.1 实验流程图

2.2.2细胞复苏、培养、传代和接种

2.2.3药物配制

2.2.4 结晶紫法测定不同浓度汉黄芩素作用后的人宫颈癌细胞存活率及其IC50

2.2.5 细胞划痕实验评估细胞迁移能力

2.2.6 Western Blot 法检测经汉黄芩素作用后人宫颈癌细胞目标蛋白的表达水平

2.2.7 统计学方法

2.3结果

2.3.1 汉黄芩素对人宫颈癌细胞的生长抑制作用

2.3.2 划痕实验评估人宫颈癌细胞迁移能力

2.3.3 汉黄芩素对人宫颈癌细胞PNI相关蛋白表达的影响

2.4讨论

2.4.1 GDNF-RET信号传导与肿瘤PNI

2.4.2 趋化因子受体CX3CR1与肿瘤PNI

2.5结论

2.6问题与展望

致谢

参考文献

综述: 宫颈癌神经周浸润可能的机制

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