含表面活性剂的聚丙烯酰胺凝胶电泳及其在肾脏病人血清蛋白分析中的应用

摘要

本文在聚丙烯酰胺凝胶中加入非离子型表面活性剂，利用亲水疏水性能不同的蛋白质与表面活性剂的结合能力不同、因而电泳迁移率也不同的特点，建立一种新的分离蛋白的电泳方法。考察了表面活性剂的种类和浓度、血清进样量等因素对蛋白分离效果的影响。用含聚乙二醇辛基苯基醚（OP）的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离肾脏病人和健康人的血清样品，比较分离出的蛋白质条带，发现肾脏病人的一条蛋白质条带染色很深，而健康人的相应蛋白质条带染色较浅。在不含OP的聚丙烯酰胺凝胶电泳中，这条蛋白条带的染色差别较小。将这条蛋白条带从胶上切下，用TPCK-Trypsin进行胶内酶解，将所得肽段通过液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析肽谱及各肽段的氨基酸序列。根据肽谱和序列信息，经数据库检索，对特异性的蛋白质进行了鉴定。确定肾脏病人的染色较深的电泳条带中的蛋白为α1-酸性糖蛋白的蛋白部分，而健康人的相应蛋白条带中除有α1-酸性糖蛋白的蛋白部分外，还有补体蛋白及脂蛋白等疏水性蛋白。由此可知，α1-酸性糖蛋白在肾脏病患者血清中的含量明显高于正常人。这种电泳方法可用于分离疏水性不同的蛋白质，也可能发展成为一种新的临床诊断肾脏疾病的技术。