人卵巢癌Skov3多细胞团簇耐药和转移共同相关基因的筛查黏附分子与Skov3多细胞团簇耐药、转移关系的研究

摘要

第一部分: 人卵巢癌Skov3多细胞团簇裸鼠腹腔转移瘤模型的建立 目的：复制人卵巢癌Skov3多细胞团簇(MCAs)裸鼠腹腔移植瘤模型，为研究卵巢癌多细胞耐药和转移机制提供技术平台。方法：用液体重叠培养系统获得卵巢癌Skov3 MCAs，将细胞团簇悬液注射裸鼠腹腔，动态观察裸鼠腹腔情况、成瘤率。H-E染色观察移植瘤细胞形态学特征。结果：Skov3 MCAs注射小鼠腹腔后3周，裸鼠成瘤率为100％。移植瘤细胞形态保持了原有细胞的特征。移植瘤生长特性、转移方式及腹水形成等与人卵巢癌临床特征相似。结论：本成功复制人卵巢癌Skov3 MCAs小鼠腹腔移植瘤模型，该模型模拟了人卵巢癌腹腔播散的生物学行为特征，为研究卵巢癌MCAs转移和耐药提供了技术平台； 第二部分: 基因芯片技术和SSH技术筛查Skov3多细胞团簇耐药和转移的共同 差异基因 目的：以cDNA基因芯片筛查卵巢癌Skov3多细胞团簇耐药和转移的共同关键调节基因和相应调节靶点：从基因转录水平分析它们之间的调控关系；以SSH技术试图发现新的功能基因，进一步从基因转录水平探索卵巢癌耐药和转移关系。方法：以Affymetrix u133A2.0基因表达谱芯片筛选Skov3单细胞(A)、MCAs(B)以及MCAs裸鼠腹腔转移瘤(C)cDNA，获取A vs B组与B vs C组变化趋势相同基因；SSH：分别获取标本A、B、C双链cDNA，Rsal酶切，两轮消减杂交后进行两次套式PCR扩增，使用斑点杂交技术对差异表达基因进行验证。组间比值大于2或小于0.5者，为存在表达差异。 结果：53个基因在A vs B组与B vs C组显示相同的变化趋势，即均为表达升高或均为表达下降。37个基因表达升高，多为细胞粘附、蛋白水解、细胞周期调控等功能有关的基因；16个基因表达下调，多与代谢、细胞分化、细胞内信号传导等功能有关；SSH法获得19条差异表达片断，A／B组有7条，6条在A组细胞表达增高，1条在B组表达增高；B／C组12条，均在B组表达增高。其中5条为线粒体基因片断，6条为基因组DNA序列，除了其中gi|21304291中含有基因KLF4、参与负调节转录、细胞增值以及中胚层细胞分化调节外，其他的5条仅含STS、repeat等结构，功能不明；其他8条多与蛋白折叠、分选、代谢等功能有关； 结论：卵巢癌MCAs耐药和转移之间可能有共同的关键调节基因、相应调节靶点和有相同的调节机制。细胞粘附、蛋白水解、细胞周期调控等功能相关基因的上调，细胞代谢、细胞分化、细胞内信号传导等功能相关基因的下调均与卵巢癌细胞耐药和转移共同相关；结果显示基因芯片技术获得结果的信息量大，结果的可重复性好，是基因表达差异筛选的理想技术，而SSH的特点在于可以筛查到未知基因片断、可富集低水平表达的差异基因等。

目录

英文缩略词表

英文摘要1

中文摘要2

英文摘要2

课题一

前言

第一部分人卵巢癌Skov3多细胞团簇裸鼠腹腔转移瘤模型的建立

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分Skov3多细胞团簇转移和耐药的共同调节基因的筛查

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

课题二黏附分子与Skov3多细胞团簇耐药和转移的关系研究

前言

第一部分 四种黏附分子与Skov3多细胞团簇对紫杉醇、顺铂的化疗敏感性、细胞周期、凋亡率、调亡相关基因和细胞内紫杉醇浓度的关系研究

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分Skov3单细胞和Skov3多细胞团簇的黏附性和转移性的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

第三部分黏附分子抗体对Skov3 MCAs形成，团簇对ECM的黏附性、扩散性和转移性的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

第四部分 Skov3 MCAs对人腹膜间皮细胞的黏附性和侵袭性以及CD29mAb的影响

前言

资料与方法

结果

讨论

第五部分 探讨CD29和E-Cad对Skov3 MCAs在裸鼠腹腔种植、转移中的作用

前言

资料与方法

结果

讨论

参考文献

英文待发论文

小结

致谢

博士后期间取得的奖励和待发表的文章