表皮生长因子受体信号通路人子宫内膜癌移植瘤孕激素耐药机制中的作用

摘要

子宫内膜癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，以腺癌多见。孕激素是当前子宫内膜癌保守治疗中最常用的药物，但耐药的发生严重影响了孕激素对子宫内膜癌的疗效。
　　 表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是一种重要的受体酪氨酸激酶，同时也是多种信号通路的交汇点，对细胞的增殖、分化、粘附、迁移、存活等起着重要作用。前期体外实验研究表明，耐药子宫内膜癌细胞往往表现为EGFR高表达，孕激素受体B（progesterone receptor isoform B，PR-B）低表达，且EGFR的高表达可使PR-B的表达下调，降低子宫内膜癌细胞对孕激素的敏感性；表皮生长因子受体酪氨酸激酶（EGFR tyrosine kinase，EGFR-TK）拮抗剂可通过阻断EGFR/MAPK信号通路来抑制耐药子宫内膜癌细胞的生长，且与MPA联用存在改善内膜癌耐药的可能性。但其作用机制目前尚不明确。故本课题旨在通过建立子宫内膜癌皮下移植瘤孕激素耐药模型，来进一步探讨EGFR信号通路在子宫内膜癌孕激素耐药机制中的研究。
　　 本课题共分三个部分：(1)人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤孕激素耐药模型的建立及其生物学特性的研究；(2)EGFR、PR-B蛋白在人子宫内膜癌皮下移植瘤中的表达；(3)阻断EGFR信号通路对子宫内膜癌孕激素耐药的影响。
　　 第一部分、人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤孕激素耐药模型的建立及其生物学特性的研究
　　 目的：建立人子宫内膜癌皮下移植瘤孕激素耐药模型，为研究子宫内膜癌孕激素耐药提供动物实验模型。
　　 方法：将人子宫内膜癌孕激素敏感型细胞株Ishikawa与孕激素不敏感型细胞株Ishikawa-pLWERNL接种至裸鼠右侧腋窝皮下，制备裸鼠皮下移植瘤模型（每组24只），观察人子宫内膜癌皮下移植瘤的生物学特性。
　　 结果：（1）人子宫内膜癌孕激素敏感型细胞株Ishikawa与孕激素不敏感型细胞株Ishikawa-pLWERNL在裸鼠体内的成瘤率均为100％（P>0.05），但后者的成瘤时间明显短于前者（P<0.05）。（2）接种人子宫内膜癌孕激素敏感型细胞株Ishikawa与孕激素不敏感型细胞株Ishikawa-pLWERNL的裸鼠移植瘤在细胞学形态和结构上保持一致，均表现为子宫内膜腺癌样结构。
　　 结论：成功建立的人子宫内膜癌皮下移植瘤孕激素耐药模型，可为研究子宫内膜癌孕激素耐药形成机制提供较理想的体内实验模型。
　　 第二部分、EGFR、PR-B蛋白在人子宫内膜癌皮下移植瘤中的表达
　　 目的：检测EGFR、PR-B在人子宫内膜癌皮下移植瘤中的表达，比较两者在Ishikawa和Ishikawa-pLWERNL移植瘤中的表达差异，探讨两者与子宫内膜癌孕激素耐药之间的关系。
　　 方法：采用免疫组织化学、Western blot法检测EGFR、PR-B在人子宫内膜癌皮下移植瘤中的表达，并比较表达差异。
　　 结果：（1）免疫组化显示，PR-B表达于移植瘤的细胞核及细胞浆中，在Ishikawa移植瘤中的阳性表达率明显高于Ishikawa-pLWERNL移植瘤（P<0.01）。EGFR阳性表达信号则定位于细胞膜上，在Ishikawa移植瘤中的阳性表达率明显低于Ishikawa-pLWERNL移植瘤（P<0.01）。（2）Western blot结果显示，Ishikawa-pLWERNL移植瘤中EGFR相对表达量明显高于Ishikawa移植瘤（P<0.05），而PR-B相对表达量则明显低于Ishikawa移植瘤，（P=0.000）。
　　 结论：孕激素不敏感型移植瘤中EGFR的表达上调可能是导致PR-B表达下降的原因。
　　 第三部分、阻断EGFR信号通路对子宫内膜癌孕激素耐药的影响
　　 目的：探讨阻断EGFR信号通路在子宫内膜癌孕激素耐药机制中的作用。
　　 方法：分别利用人子宫内膜癌孕激素敏感型细胞株Ishikawa和孕激素不敏感型细胞株Ishikawa-pLWERNL制备裸鼠皮下移植瘤；成瘤后，分别将接种Ishikawa细胞株和接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠各分成4组（每组6只），分别给予甲羟孕酮（MPA组）、吉非替尼组（吉非替尼组）、MPA+吉非替尼（两药联合组）、生理盐水（对照组），并描绘肿瘤生长曲线。疗程结束后称量各组肿瘤湿重，采用Western blot法检测肿瘤组织中PR-B与EGFR信号通路蛋白的表达。
　　 结果：（1）在接种Ishikawa细胞株的裸鼠中，与对照组相比，MPA组、吉非替尼组及两药联合组可有效抑制移植瘤的生长，肿瘤湿重分别减轻43.0％、31.5％、37.7％（P 均<0.05）；在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠中，吉非替尼组与两药联合组较对照组可显著抑制移植瘤生长，肿瘤湿重分别减轻35.7％、37.7％（P<0.05），而MPA组对移植瘤无明显抑制作用，湿重仅减轻2.9％（P>0.05）。（2）接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤中，MPA组、两药联合组PR-B表达明显低于对照组（P<0.01），而单用吉非替尼则对PR-B表达无影响（P>0.05）；在接种Ishikawa-pLWERNL 细胞株的裸鼠移植瘤中，各组PR-B表达无显著差异（P>0.05）。（3）在接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤中，与对照组相比，MPA 组、吉非替尼组及两药联合组均有效减少p-EGFR、p-Erk1/2、p-AKT的表达（P<0.05）；在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠中，吉非替尼组与两药联合组较对照组可显著降低p-EGFR、p-Erk1/2、p-AKT的表达，而MPA组p-EGFR、p-Erk1/2、p-AKT则表达升高（P <0.01）。
　　 结论： EGFR酪氨酸激酶拮抗剂——吉非替尼可有效阻断EGFR信号通路，抑制肿瘤生长，尤其对接种Ishikawa-pLWERNL细胞株产生的移植瘤效果更显著。吉非替尼与MPA联用可改善子宫内膜癌耐药。

目录

前 言

第一部分 人子宫内膜癌皮下移植瘤孕激素耐药模型的建立及其生物学特性的研究

全文小结

参考文献

附 录综 述癌干细胞与子宫内膜癌的研究进展

攻读硕士学位期间发表的文章、攻读硕士学位期间参与的课题

致 谢

论文说明:英文缩写词表

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