结肠癌微环境中CCR6在调节性T细胞及肿瘤细胞中作用的研究

摘要

第一部分结肠癌微环境中CCR6在调节性T细胞中作用的研究
　　肿瘤相关巨噬细胞通过上调肿瘤组织CCL20来招募CCR6阳性调节性T细胞并促进小鼠结肠癌发生发展
　　肿瘤相关巨噬细胞在结肠癌微环境中发挥重要的作用。相对于其他肿瘤，有关巨噬细胞在结肠癌微环境中作用的研究还未统一。另外，在结肠癌微环境中浸润着大量FoxP3阳性的调节性T细胞。然而在结肠癌的微环境中，肿瘤相关巨噬细胞怎样招募调节性T细胞并且参与机体局部的肿瘤免疫的机制还未完全了解。
　　在本研究中，我们通过构建小鼠结肠癌皮下移植瘤模型，发现肿瘤组织中浸润着大量表达趋化因子受体CCR6的调节性T细胞。不管是在体内还是体外实验中，小鼠CMT93结肠癌细胞和肿瘤相关巨噬细胞都分泌CCR6的唯一配体CCL20。另外，在小鼠皮下移植瘤的肿瘤微环境中注射重组CCL20会招募大量的调节性T细胞并且显著促进肿瘤的发生发展。最后，在CD11b-DTR全身选择性敲除巨噬细胞的小鼠建立皮下移植瘤后导致肿瘤微环境中趋化因子CCL20分泌减少，并且阻止了肿瘤微环境中调节性T细胞的迁移。
　　综上所述，我们的研究揭示了在小鼠结肠癌模型的肿瘤微环境中，肿瘤相关巨噬细胞通过分泌趋化因子CCL20招募表达CCR6的调节性T细胞并且促进肿瘤的发生发展，并为以后结肠癌的免疫治疗提供了潜在的靶标。
　　第二部分结肠癌微环境中CCR6在结肠癌细胞中作用的研究CCR6在结肠癌的转移过程起着决定性的作用
　　肿瘤细胞的迁移和转移和体内白细胞的游动有着很多的相似之处，都是由趋化因子和趋化因子受体的相互作用来调节。最近有报道趋化因子CCR6和结肠癌的远端转移有很强相关性。然而，到目前为止，CCR6与结肠癌的发生发展是否有直接关联还未见报道。
　　CCR6在结肠癌的细胞株和结肠癌病人肿瘤标本中都有高度表达。CCR6的高表达和结肠癌病人的分期和生存期都有强烈相关性。在人结肠癌细胞株HCT116中过表达CCR6会导致其细胞的生长、迁移和集落形成能力增强。在裸鼠结肠癌转移模型中，相比于对照细胞，过表达CCR6的HCT116结肠癌细胞株转移能力明显增强。CCR6通过AKT信号通路的过度活化，上调肿瘤转移基因和下调肿瘤转移抑制基因来促进其结肠癌细胞的恶性程度。和结肠癌病人肿瘤组织中CCR6表达上调相一致，我们在小鼠结肠癌皮下移植瘤模型中发现小鼠结肠癌细胞CCR6表达也相应升高。最后，在小鼠皮下移植瘤模型的肿瘤微环境中特异性阻断肿瘤细胞上CCR6的功能会显著抑制结肠癌的发生发展。
　　趋化因子受体CCR6不管在体外还是体内，都在结肠癌细胞的恶性程度中扮演着重要角色。结肠癌中CCR6的过度表达预示着结肠癌病人生存期的缩短。所以，特异性的阻断肿瘤细胞CCR6的功能对于治疗结肠癌将会是一个全新的有效的治疗策略。

目录

声明

全文中英文缩略词表

第一部分 结肠癌微环境中CCR6在调节性T细胞中作用的研究

摘要

第一章 前言

第二章 小鼠结肠癌模型外周血和肿瘤组织中调节性T细胞显著上调

第一节 材料和方法

第二节 结果

第三章 CCR6促进肿瘤微环境中调节性T细胞迁移

第一节 材料和方法

第二节 结果

第四章 小鼠结肠癌细胞和肿瘤相关巨噬细胞共同分泌CCL20

第一节 材料和方法

第二节 结果

第五章 肿瘤微环境中CCL20招募调节性T细胞并促进肿瘤生长

第一节 材料和方法

第二节 结果

第六章 选择性敲除巨噬细胞减少小鼠肿瘤组织CCL20表达并抑制调节性T细胞趋化和结肠癌生长

第一节 材料和方法

第二节 结果

第七章 讨论和结论

第一节 讨论

第二节 结论

参考文献

第二部分 结肠癌微环境中CCR6在结肠癌细胞中作用的研究

摘要

第一章 前言

第二章 人结肠癌手术标本及结肠癌细胞株CCR6表达水平的分析

第一节 材料和方法

第二节 结果

第三章 建立稳定过表达CCR6的HCT116结肠癌细胞株

第一节 材料和方法

第二节 结果

第四章 CCR6显著促进结肠癌细胞迁移和克隆形成能力

第一节 材料和方法

第二节 结果

第五章 CCR6显著促进小鼠结肠癌体内转移

第一节 材料和方法

第二节 结果

第六章 CCR6外源性过表达激活结肠癌细胞发生AKT信号通路

第一节 材料和方法

第二节 结果

第七章 CCR6外源性过表达激活肿瘤转移相关基因表达

第一节 材料和方法

第二节 结果

第八章 选择性阻断结肠癌细胞CCR6功能显著抑制结肠癌发生发展

第一节 材料和方法

第二节 结果

第九章 讨论和结论

第一节 讨论

第二节 结论

参考文献

致谢

附录一 博士期间发表和待发表的论文目录