艰难梭菌感染的临床特征、分子流行病学及肠道菌群研究

摘要

目的：本课题旨在分析老年住院患者艰难梭菌感染（Clostridium difficile infection，CDI）的临床特征并评估其相关的危险因素，寻找临床与社区分离的艰难梭菌在毒素型、基因分型和耐药性上的差异，以及探究艰难梭菌感染患者和无症状艰难梭菌定植者肠道菌群的改变，为艰难梭菌相关性疾病的预防、治疗和监控提供参考和依据。
　　方法：第一部分，对2010年12月至2013年5月间上海某三甲医院大于60岁的202名老年住院患者的病史资料进行回顾性分析，其中包含52名CDI患者（病例组）和随机选取的150名非CDI患者（对照组）。采用适当的统计学方法比较病例组和对照组之间临床表现、实验室指标和治疗用药等方面的差异，并用logistic回归分析评估一系列与老年住院患者艰难梭菌感染相关的危险因素。第二部分，对来源于临床CDI患者的45株艰难梭菌和来源于社区无症状艰难梭菌定植者的12株艰难梭菌（共计57株）进行毒素基因检测，并通过多位点序列分型技术实现菌株的基因分型，同时采用琼脂稀释法分析菌株对8种抗菌药物（包括：克林霉素、四环素、头孢西丁、头孢噻肟、莫西沙星、亚胺培南、甲硝唑和万古霉素）的敏感性。第三部分，我们收集8名CDI患者、8名无症状艰难梭菌定植者和9名健康受试者的新鲜粪便样本，采用16S rRNA基因高通量焦磷酸测序法对三组样本进行肠道菌群分析，并借助生物信息学技术，从细菌“门”和“属”水平比较CDI患者、无症状艰难梭菌定植者和健康受试者间肠道菌群组成的差异。
　　结果：在老年住院患者中，CDI患者相比非CDI患者表现出白细胞计数升高、血清白蛋白含量降低、住院时间延长、死亡率上升等特征。多变量分析表明，老年住院患者艰难梭菌感染与血清肌酐水平（OR1.004;95％CI1.001-1.008）、共病数量（OR2.573;95%CI1.353-4.892）、外科手术史（OR6.132;95%CI2.594-14.493）、胃肠道疾病（OR4.670;95%CI2.002-10.895）和抗生素使用（OR6.718;95%CI2.846-15.859）密切相关。临床分离的艰难梭菌菌株均产毒素，毒素型以A+B+型为主，ST-37型为流行克隆，占33.3%；而社区分离菌株中含无毒株，且存在某些与临床分离菌株相同的ST型。此外，临床分离菌株的多重耐药率高于社区分离菌株，尤其对氟喹诺酮类药物的耐药率明显上升。CDI患者和无症状艰难梭菌定植者存在不同程度的肠道菌群失调，与健康人相比，他们的肠道微生物丰度和多样性均明显降低，肠道菌群组成中拟杆菌门和厚壁菌门的比例下降、变形菌门的比例升高，且缺失某些产丁酸盐的肠道正常共生菌。主坐标分析显示，CDI患者与无症状艰难梭菌定植者之间的肠道菌群结构也存在明显差异。
　　结论：血清肌酐水平升高、共病数量增加、外科手术史、胃肠道疾病和抗生素使用是老年住院患者艰难梭菌感染的危险因素。多重耐药性可能是导致CDI流行传播的重要原因之一，而社区无症状艰难梭菌定植者很可能成为临床艰难梭菌感染的潜在来源。肠道菌群的改变不仅影响CDI的发生，还对艰难梭菌相关性疾病状态具有一定的指示作用。

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绪论

1. 艰难梭菌感染的流行状况

2. 艰难梭菌的毒素与致病机理

3. 艰难梭菌感染的危险因素与传播途径

4. 艰难梭菌的耐药情况

第一部分 老年住院患者艰难梭菌感染的临床特点及危险因素分析

引言

材料与方法

结果

讨论

第二部分 临床和社区分离艰难梭菌的毒素检测、药物敏感性分析与基因分型研究

引言

材料与方法

结果

讨论

第三部分 艰难梭菌感染与无症状艰难梭菌定植的肠道菌群组成分析

引言

材料与方法

结果

讨论

全文总结

参考文献

致谢

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