化学小分子联合生长因子诱导成纤维细胞转分化为多巴胺能神经元和施旺细胞的研究

摘要

外源过表达特异性转录因子，促进哺乳动物的体细胞转分化为多巴胺能神经元（Dopaminergic neuron，DA），这是一种有希望治疗帕金森病（Parkinson’s Disease，PD）的方法。但这种方法存在一些缺点，例如可能引起病毒载体整合到宿主细胞的基因组中，这种潜在的危险限制了其临床应用，因此，目前能找到一个更可靠的产生多巴胺能神经元的方法非常关键。目前，我们的实验结果证明鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblsts,MEFs）在化学小分子联合生长因子的诱导下可以转分化成多巴胺能神经元。
　　本研究证明了这些神经元样细胞具有神经元的形态和免疫化学特征，而且证明了这些神经样细胞可表达神经元的标志蛋白，进一步的钙成像试验也证明这种神经元样细胞具有同神经元相似的钙电流的电生理特性。更重要的是，这些转分化而来的细胞可以分泌多巴胺，表明这些细胞在功能上与多巴胺能神经元非常相近。综上所述，我们的研究证明，在不引入转录因子的情况下，通过化学小分子联合生长因子诱导产生多巴胺能神经元的方法，可能对帕金森病的治疗带来新的希望。脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)是由于外伤、炎症、肿瘤等原因引起脊髓横贯性损害而出现损伤平面以下的运动、感觉、括约肌及自主神经等功能障碍。在脊髓损伤的治疗中，施旺细胞(Schwann cells,SC)已经被证明通过分泌神经营养因子促进损伤的神经元再生。目前可以通过胚胎干细胞或诱导型多能干细胞分化为施旺细胞，也可以诱导鼠胚胎成纤维细胞先去分化为神经嵴细胞再分化为施旺细胞。在这里，我们证明鼠胚胎成纤维细胞在化学小分子和生长因子的诱导下可以转分化为施旺细胞。通过施旺细胞标志物 PLP和 S100β免疫荧光染色和Q-PCR实验证明转分化的细胞具有施旺细胞的免疫化学特性和基因表达特性。综上所述，我们的研究证明了通过化学小分子和生长因子可以将鼠胚胎成纤维细胞转分化为施旺细胞，并且这种方法可能对脊髓损伤的治疗带来新的希望。

目录

化学小分子联合生长因子诱导鼠成纤维细胞转分化为多巴胺能神经元的研究

摘要

ABSTRACT

第一章 绪 论

1.1帕金森病治疗的研究进展

1.2 多巴胺能神经元的来源

1.3 化学小分子在去分化和转分化中的应用

1.4 TGF-β与BMP抑制剂在神经分化中的作用

第二章 材料和方法

2.1 实验材料

2.2常用实验操作

第三章 结 果

3.1成纤维细胞没有残留的神经细胞或神经祖细胞

3.2 化学小分子SB431542和Noggin联合生长因子可以使成纤维细胞转分化为多巴胺能神经元

3.3 化学诱导成分的作用

3.4 鉴定转分化的多巴胺能神经元的功能

第四章 结束语

4.1 讨论

4.2 结论

4.3 研究意义

4.4 展望

化学小分子联合生长因子诱导成纤维细胞转分化为施旺细胞的研究

摘要

ABSTRACT

第一章 绪 论

1.1施旺细胞的体内发育

1.3施旺细胞对神经再生的作用

1.4施旺细胞在脊髓损伤中的应用

1.5施旺细胞在脱髓鞘疾病中的应用

1.6施旺细胞的分化方法

第二章 材料和方法

2.1实验材料

2.2 实验操作

第三章 结果

3.1 成纤维细胞中没有残留的神经干细胞和胶质细胞

3.2 联合使用化学小分子（SB431542、Noggin、Forskolin、NaB）和生长因子可以使成纤维细胞转分化为施旺细胞

3.3 化学诱导成分的作用

第四章 结束语

4.1 讨论

4.2 结论

4.3 研究意义

4.4 展望

参考文献

致谢

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