孔雀石绿替代药物的筛选及其对水霉病的防治效果研究

摘要

本实验论文共分为四个部分。第一部分：鱼类水霉病人工感染方法的建立；第二部分：药物筛选；第三部分：初筛目标药物的临床药效及安全性评价、第四部分：初筛目标药物复配制剂的临床药效及安全性评价。具体内容如下： 第一部分：实验选择对鱼体肌肉刮伤、养殖水温度剧变、水霉菌株浸泡鱼体三个条件对草鱼、鲫进行水霉病人工感染。通过根据不同条件分组的感染结果分析确定影响水霉病人工感染的条件。实验结果显示选择上述任何单一条件都无法对草鱼、鲫成功进行感染，而选择鱼体肌肉刮伤、养殖水温度剧变、水霉菌株浸泡鱼体三个条件同时实施则取得了非常好的效果，该实验组的草鱼、鲫24h内即可被成功感染，且感染率为100％±0，实验表明受伤是感染水霉病的一个必要条件，而温度变化是感染水霉病的一个重要影响条件。进而对该方法做三次重复性实验，每次设三个平行对照缸，进行可靠性评价，F检验结果显示该方法下对草鱼、鲫人工感染，各重复次数间差异不显著(P>0.05)，该方法具有良好的重现性、可靠性好，成功建立了鱼类水霉病的人工感染方法。该方法的建立为抗水霉药物的筛选和药物临床药效实验提供了可靠的病理模型来源，同时也为水霉病发生、发展规律的研究提供理论依据。 第二部分：以药物对水霉的体外作用效果为筛选模型，对待筛选药物库的药物进行体外初步筛选。由于筛选药物药物数量较大，仅以初筛目标化合物BYK-1为例进行方法说明。通过该模型，筛选出包括初筛目标化合物BYK-1在内的几种对水霉体外作用效果较好的初筛目标化合物。初筛目标化合物BYK-1对水霉孢子三个菌量的MIC均为3mg/L。对水霉菌丝的三个菌量在8mg/L浓度下作用1h即有杀灭作用，且随着浓度的升高，有效杀灭时间也随之降低。 第三部分：对初筛目标化合物BYK．1进行复筛，复筛内容包括实验室临床药效、安全性评价。实验显示初筛目标化合物BYK-1对水霉病的预防有很好的保护率，其中泼洒方式在药物浓度为3mg/L时对草鱼、鲫的保护率分别可达到90％、96.7％；浸泡方式在浓度为16mg/L时对草鱼、鲫的保护率分别为83.3％、80％；在治疗方面实验结果显示，浸泡用药方式效果远好于泼洒方式，泼洒方式在3mg/L 浓度时对草鱼、鲫的保护率仅有6.67％和13.3％，而浸泡方式对草鱼和鲫的保护率均为43.3％。安全性实验(急性毒性实验)结果显示在水温20℃时，初筛目标化合物BYE-1对草鱼、鲫的半数致死浓度LD50 分别为15.73、16.90mg/L，相应的安全浓度则分别为1.573、1.690。 第四部分：拟通过药物复配，利用药物间的协同作用，达到提高药效、降低毒性的作用。体外药效实验表明初筛目标化合物BYK-1与F-1按1：3比例复配效果最佳。临床药效实验显示：在预防方面：泼洒方式用药，单独使用初筛目标化合物BYK-1在3mg几浓度下对草鱼、鲫的保护率分别为90％、96.7％，而复配后在0.8mg/L浓度下分别达到96.7％、100％。浸泡方式用药，单独使用初筛目标化合物BYK-1在16mg/L时对草鱼、鲫的保护率分别为83.3％、80％，而复配后8mg/L浓度时对草鱼、鲫水霉病的保护率达到93.3％、100％；从治疗方面来看，泼洒用药方式下单独使用初筛目标化合物BYK-1在浓度3mg几浓度时对草鱼、鲫的保护率仅有6.67％和13.3％，而复配后1.5mg/L浓度时对草鱼、鲫的保护率36.7％和40％。浸泡用药方式下16mg/L时对草鱼和鲫的保护率为50％、53.3％。对草鱼、鲫的半数致死浓度LD50 分别由复配前的15.73、16.90mg/L提高到18.36、20.45mg/L，相应的安全浓度也由复配前的1.573、1.690mg/L提高到1.936、2.045mg/L。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章鱼类水霉病人工感染方法的建立

1材料与方法

1.1实验用鱼

1.2菌株来源

1.3饲养管理

1.4水霉培养及水体增值

1.5实验设计

1.6数据处理

2结果

2.1人工感染结果

2.2方法可靠性评价

3讨论

第二章药物体外筛选

1材料与方法

1.1实验药物和试剂

1.2菌株来源

1.3对水霉体外作用效果实验

2结果

2.1化合物BYK-1对水霉孢子的MIC

2.2化合物BYK-1对水霉菌丝的杀灭作用

3讨论

第三章初筛化合物的临床药效和安全性评价

第一节初筛化合物BYK-1对草鱼、鲫水霉病的防治效果

1材料与方法

2结果

3讨论

第二节初筛化合物BYK-1的安全性评价

1材料与方法

2结果

3小结

第三节初筛化合物BYK-1对斑马鱼卵水霉病防治效果

1材料与方法

2结果

3讨论

第四章复配制剂的药效和安全性评价

第一节化合物BYK-1复配制剂的体外效果评价

1材料与方法

2结果

3小结

第二节化合物BYK-1复配制剂对草鱼、鲫鱼水霉病的防治效果

1材料与方法

2结果

3讨论

第三节化合物BYK-1复配制剂的安全性评价

1材料与方法

2结果

3小结

第四节化合物BYK-1复配制剂对斑马鱼卵水霉病的防治效果

1材料与方法

2结果

3小结

结论

参考文献

致谢