抗TCR抗体诱导正常和NOD小鼠胸腺细胞阴性选择

摘要

该文根据抗TCR单克隆抗体对正常BALB/C及自身免疫性糖尿病模型NOD小鼠胸腺细胞阴性选择的诱导研究,得出以下结论.1.抗TCR抗体、PMA、Con A诱导胸腺及外周T细胞的活化分裂,我们用CFSE标记细胞、流式细胞仪分析法检测,证明此法不仅可以测定单细胞水平上细胞的分裂,还可根据荧光强度判断细胞的分裂次数.2.正常BALB/C小鼠胸腺不同亚群T细胞对抗TCR抗体诱导敏感性有差异,CD3<'->CD4<'->(三阴TN)、CD8<'+>CD3V<'->、CD3<'+>CD4<'+>CD8<'->(单阳SP)、CD3<'+>CD4<'->CD8<'+> SP细胞出现不同变化,TN细胞相对耐受凋亡,而CD8<'+>CD3<'->、DP细胞对凋亡诱导敏感.3.胸腺和脾脏表面CD3、CD4、CD8的表达与性别无明显关系,6-9周小鼠脾脏CD<'+>细胞明显多于3-4周小鼠;胸腺细胞的增殖与年龄、性别无关,而3周雌性小脾细胞对PMA+IONO刺激事的增殖应答比雄性明显,4-6周雄小鼠脾细胞的增殖能力强于雄性小鼠,7-8周雌性小鼠脾细胞对抗TCR抗体的应答能力明显减小.表明免疫系统的雌雄异型可能早于青春期.4.雌、雄不同性别BALB/C小鼠对相同TCR受体诱导凋亡的敏感性有差异,雄性小鼠胸腺细胞的凋亡明显于雌性.且随着大量皮质区CD4<'+>CD8<'+>胸腺细胞的凋亡,CD4<'->CD8<'->细胞、成熟的髓质CD4<'+>CD8<'+>细胞水平无明显改变.5.anti-CD28 mAb诱导胸腺细胞的凋亡.胸腺T细胞对anti-CD28 mAb或anti-CD28 mAb+CD28 mAb刺激的不同应答与细胞的成熟阶段密切相关.胸腺皮、髓质中的胸腺细胞亚群发生凋亡时,经CD28传导的胞内途径均受到影响.6.抗TCR抗体处置后,小鼠成熟髓质区高表达T细胞受体的单阳性细胞数目成倍增加,皮质区低表达T细胞受体的不成熟双阳性细胞数目减少.成熟的单阳性胸腺细胞高表达归巢受体L-selectin,表型分析(TCRαβ、CD69、HSA、Vβ7-integrin、Qa-2)显示增加的这群细胞为胸腺的新迁出细胞,同时小鼠外周淋巴结及脾脏CD4<'+>、CD8<'+>新迁出细胞数量减少,表明抗TCR抗体能抑制胸腺T细胞向外周迁移.7.与BALB/c小鼠胸腺细胞结果相比较:抗TCR抗体诱导的增殖应答较弱,此种缺乏与年龄及NOD胸腺CD4<'+>CD8<'->和CD4<'->CD8<'+>SP细胞有关.8.与BALB/c小鼠胸腺细胞结果相比较:1)双信号刺激对NOD和BALB/c CD4<'+>CD8<'+>亚群的明显促凋亡作用相似;而NOD小鼠髓质6C10<'+>HSA<'hi>CD4<'+>CD8<'->SP细胞对anti-TCRmAb+CD28mAb介导凋亡的敏感性明显弱于BALB/c小鼠.2)体内抗TCR抗体处置后,NOD髓质6C10<'+>HSA<'hi>CD4SP不成熟单阳细胞的凋亡耐受明显.表明NOD小鼠胸腺髓质不成熟单阳性细胞亚群的阴性选择缺乏,反映了NOD小鼠疾病的发作可能不仅与外周耐受有关、同时与胸腺细胞中的枢耐受有关.

目录

英文缩略语

文献综述

一、胸腺免疫耐受研究进展简介

二、胸腺免疫耐受的机制

三、胸腺免疫耐受的途径

四、胸腺免疫耐受的诱导方法

五、NOD小鼠的胸腺免疫耐受

第一部分

一.流式细胞术测定淋巴细胞的增殖

二.TCR抗体诱导不成熟胸腺细胞亚群凋亡的敏感性

三.年龄、性别对幼鼠免疫T细胞的影响

四.性别对T细胞受体抗体诱导的小鼠胸腺细胞亚群凋亡的影响

五.CD28协同刺激分子对T细胞受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响

六.抗鼠T细胞受体抗体抑制胸腺细胞的迁出

第二部分

一.NOD小鼠胸腺细胞TCR介导的信号通路缺陷

二.NOD小鼠胸腺6C10+HSAHiCD4+CD8-单阳性细胞的阴性选择缺乏

总 结

参考文献

致 谢

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