泰山四叶参多糖分离纯化、理化特性及生物学活性研究

摘要

目的:
　　 探讨泰山四叶参多糖分离纯化的方法;探讨泰山四叶参总多糖及均一组分的理化特性;观察泰山四叶参总多糖(PCL)对四氧嘧啶诱导的糖尿病模型小鼠血糖和抗氧化能力的影响;观察泰山四叶参总多糖的抗疲劳作用;探讨泰山四叶参多糖主要组分的体外抗氧化活性及对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响。
　　 方法:
　　 ①以泰山四叶参为材料，经热水提取、乙醇沉淀得泰山四叶参总多糖，通过二乙氨基乙基纤维素-52柱分离纯化;采用SephadexG-100凝胶层析，紫外光谱(200～600nm)扫描鉴定多糖主要组分的纯度;多角度激光光散射仪与体积排阻色谱法联用(MALLS-SEC)测泰山四叶参多糖组分的相对分子质量(Mr)及其分布。②采用物理和化学方法研究泰山四叶参多糖总多糖及均一组分的理化性质;GC分析单糖的组成和摩尔比，咔唑-硫酸法测定糖醛酸的含量，并进行红外光谱扫描。③采用四氧嘧啶腹腔注射法，建立糖尿病小鼠模型，将小鼠分成5组:正常对照组、模型组、阳性对照组(盐酸二甲双胍，200mg·kg-1)、PCL低剂量组(400mg·kg-1)、高剂量组(800mg·kg-1)，连续灌胃14d后，测定各组血糖、胸腺和脾脏指数，检测血清和肝脏中的超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。将小鼠分为PCL低、中、高3个剂量组和正常对照组，分别灌胃200、400、800mg/kgPCL和0.9％生理盐水，21d后记录小白鼠负重游泳时间，采血分离血清及取组织样，试剂盒测定血尿素氮(BUN)含量、血清乳酸以及肝糖元含量等与疲劳相关的生化指标。羟自由基(·OH)由Fenton反应体系产生，超氧阴离子(O2-·)由邻苯三酚自氧化法产生，硫代巴比妥酸法测定肝匀浆MDA相对含量反映PCL对脂质过氧化的影响，并观察泰山四叶参主要组分对H2O2诱导红细胞溶血的影响。在体外化学模拟条件下测定泰山四叶参多糖主要组分的总还原能力;分离正常小鼠脾脏淋巴细胞并进行体外培养，在细胞培养体系中分别加入终浓度为20、40、80、160mg·mL-1泰山四叶参多糖主要组分及其配合脂多糖(LPS)(10mg·L-1)或终浓度为10、20、40、80mg·mL-1泰山四叶参多糖主要组分及其配合刀豆素(ConA)(5mg·L-1)作用48h，用MTT法测定细胞的增殖程度。
　　 结果:
　　 ①经水提醇沉法得到四叶参总多糖(PCL)，收率为11.3％，经分离纯化得多糖主要组分PCL-1、PCL-2、PCL-3、PCL-4，经凝胶层析检测显示单一对称峰;200～600nm扫描未见蛋白质、核酸的特征吸收峰。PCL-1和PCL-3的表观分子质量分别为4.2×103、1.8×104。②PCL-1和PCL-2均不含淀粉、蛋白质，糖醛酸含量分别为含量分别为13.87％、46.34％，均为β-构型糖苷键的吡喃糖。PCL-1由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖组成，摩尔组成比依次为0.68∶0.93∶0.12∶1;PCL-3由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖组成，摩尔组成比依次为0.52∶0.22∶0.22∶1∶0.17。③与模型组比较，PCL高、低剂量组和阳性对照组糖尿病小鼠血糖明显降低，小鼠的胸腺和脾脏指数，血清和肝脏SOD活性明显提高，MDA含量降低。PCL高剂量组与盐酸二甲双胍组比较，各观察指标无显著性差异。PCL能延长小鼠的负重游泳时间，降低了运动后血清尿素氮和血乳酸的增量，各剂量组肝糖原含量与正常组比较，无显著性差异;PCL-1、PCL-2、PCL-3和PCL-4能清除·OH和O2-·，抑制小鼠肝匀浆脂质过氧化反应，对还原力没有明显影响。PCL-2、PCL-3和PCL-4能抑制H2O2诱导红细胞溶血，但PCL-1能促进H2O2诱导红细胞溶血;PCL-1、PCL-2和PCL-3能显著增强ConA诱导的T淋巴细胞和LPS诱导的B淋巴细胞的增殖作用，而PCL-4只能显著增强LPS诱导的B淋巴细胞的增殖作用。
　　 结论:
　　 ①提取、分离、纯化泰山四叶参总多糖及其主要组分的方法可行。②初步明确了泰山四叶多糖及其主要组分的理化特性。③PCL能降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的血糖，提高小鼠的抗氧化能力;PCL具有良好的抗疲劳作用;PCL-2、PCL-3和PCL-4具有一定的体外抗氧化作用;PCL-1、PCL-2和PCL-3与ConA、LPS对T、B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用，PCL-4仅与LPS对B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用。

目录

摘要

符号说明

前言

第一部分 泰山四叶参总多糖的提取及主要组分的纯化

材料

方法

结果

讨论

第二部分 泰山四叶参总多糖及主要组分的理化特性

材料

方法

结果

讨论

第三部分 泰山四叶参多糖的生物学活性

第1节 泰山四叶参总多糖对糖尿病小鼠血糖和抗氧化能力的影响

材料

方法

结果

讨论

第2节 泰山四叶参总多糖抗疲劳作用

材料

方法

结果

讨论

第3节 泰山四叶参多糖主要组分体外抗氧化作用

材料

方法

结果

讨论

第4节 泰山四叶参多糖主要组分体对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响

材料

方法

结果

讨论

结论

本课题研究不足和后续的研究工作

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间发表的学位论文

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