青藤碱在黑色素合成以及皮肤炎症中的作用及其外用制剂的初步研究

摘要

研究背景:
　　青藤碱是一种从防己科植物青藤中分离出的单体生物碱，其结构类似吗啡。青风藤在东亚被用于治疗风湿性疾病已有百年历史，具有抗炎、免疫抑制等传统药理作用，但还未见青藤碱对皮肤性炎症治疗作用的报道。青藤碱也具有抗肿瘤、缓解神经性疼痛、减轻吗啡及海洛因成瘾或戒断症状等生物学活性。生物碱类毒品存在与黑色素的结合位点，且青藤碱已知的作用靶点与调控黑色素合成限速酶——酪氨酸酶活性的相关信号通路存在交叠，作为吗啡类似物的青藤碱是否能发挥美白的作用，也未见报道。
　　研究目的:
　　研究青藤碱对已存在的黑色素、黑色素合成过程以及对酪氨酸酶活性的影响。基于青藤碱的结构特征，探索青藤碱是否具有一定的抗氧化能力。考察青藤碱对炎症性皮肤病是否有治疗潜质。制备青藤碱凝胶剂，探索青藤碱在外用制剂中是否能到达皮肤深层发挥作用以及对皮肤是否具有安全性。
　　研究方法:
　　1.通过CCK-8法考察青藤碱在不同浓度下（1500-0.14μg/mL）对细胞增殖（B16-F10细胞，HepG2细胞，HaCaT细胞，人真皮成纤维细胞）的影响，确定合适的体外给药浓度范围。
　　2.以B16-F10细胞为模型，熊果苷为阳性对照，通过氢氧化钠裂解法考察青藤碱在10-100μg/mL浓度范围内对黑色素合成抑制率以及对存在黑色素的消除率（毛喉素和8-MOP诱导B16-F10细胞造模），通过多巴氧化法测定青藤碱对细胞中酪氨酸酶活性的抑制率。
　　3.以HepG2细胞为模型，维生素C为阳性对照，检测青藤碱在33.3-300μg/mL浓度范围内的抗氧化能力。
　　4.以ELISA为检测方式，先筛选在TNF-α诱导下的表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞可分泌的细胞因子(被筛选的细胞因子:IL-1β，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10，MMP-1，MMP-9)。从TNF-α刺激HaCaT细胞和真皮成纤维细胞分泌的细胞因子的时效及量效曲线，确定青藤碱干预实验中的检测指标以及TNF-α刺激的剂量和时间，再进行青藤碱的干预实验。
　　5.制备青藤碱和盐酸青藤碱凝胶剂，用高效液相色谱法建立青藤碱以及盐酸青藤碱的体外含量测定方法，采用体外透皮实验考察比较两种凝胶剂的平均透皮速率和12h累积渗透量。
　　6.制备青藤碱和盐酸青藤碱凝胶剂，以新西兰白兔为模型（正常皮肤组、破损皮肤组），分别考察凝胶剂在单次以及多次给药后，对皮肤的刺激性。
　　研究结果:
　　1.当青藤碱浓度为300μg/mL以下时，各细胞系以及人真皮成纤维细胞的存活率均可达到85％以上。
　　2.青藤碱可以消除已存在的黑色素（浓度为100μg/mL时，存在的黑色素消除率为68.2％），有效抑制黑色素的合成(浓度为100μg/mL时，黑色素合成抑制率为36.8％)，并可以抑制酪氨酸酶活性(浓度为100μg/mL时，酪氨酸酶活性抑制率为39.3％)。
　　3.青藤碱和维生素C的给药浓度梯度为0，33.3，100和300μg/ml。青藤碱各给药浓度对应的羰基化平均抑制率是1.3％，30.4％，59.8％和52.5％。维生素C各给药浓度对应的羰基化平均抑制率是1.2％，31.1％，58.3％和65.1％。
　　4.ELISA结果显示，青藤碱与其盐酸盐形式，可抑制皮肤细胞被TNF-α诱导分泌的IL-6、MMP-1和MMP-9(P＜0.01)，其均对诱导分泌的IL-8无效（P＞0.05）。
　　5.青藤碱凝胶经皮渗透作用良好，在相同处方下，青藤碱凝胶的透皮速率和累积渗透量均显著高于盐酸青藤碱凝胶。
　　6.青藤碱以及盐酸青藤碱凝胶对皮肤刺激性较小，具有一定的安全性。
　　综上所述，青藤碱具有缓解皮肤炎症，改善和保护正常肤色，促进皮肤内环境稳态的潜质。并且，青藤碱凝胶经皮渗透作用良好、对皮肤刺激性小。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 青藤碱对黑色素合成的影响以及抗氧化能力的研究

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论

第二部分 青藤碱对肿瘤坏死因子α刺激皮肤细胞分泌细胞因子的影响

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论

第三部分 青藤碱凝胶剂体外透皮特征的研究

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论

第四部分 青藤碱凝胶剂的皮肤刺激性实验

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论

全文总结

参考文献

综述 青藤碱药理作用的研究进展

在读期间科研成果

致谢