富氢水对高胆固醇血症患者血脂及高密度脂蛋白功能的影响

摘要

研究背景:
　　动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是一组称为动脉硬化的血管病中最常见、最重要的一种。临床研究表明，异常的脂质代谢是AS标志性的危险因素，常见于高胆固醇血症。高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL）具有抗AS的生物学特性，包括抗氧化、抗炎症、促进胆固醇逆向转运等，其功能与HDL结构、组分和代谢密切相关。某些代谢性疾病状态，如高脂血症、糖尿病等，可降低HDL的生物学活性，从而加速AS的进程。
　　研究表明，氢气（H2）是一种新型抗氧化剂，可以减少氧化应激的发生。吸入氢气或饮用富含氢气的液体可治疗某些氧化损伤性疾病，如糖尿病、脑卒中、慢性肝炎等。本课题组前期研究发现，通过口服富氢水能够降低代谢综合征患者血浆总胆固醇（total cholesterol，TC）和低密度脂蛋白（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的水平，提高HDL功能。我们团队前期的研究为饮水前后对照，含非盲性试验设计，无安慰剂组作为对照，其研究结果不能排除气候变化和受试人员自身因素的影响。
　　研究目的:
　　本研究采用双盲随机安慰剂对照试验，研究富氢水对高胆固醇血症患者血浆脂蛋白的组分、含量及生物活性的影响，并对饮水前后体内pre-β1-HDL水平和pre-β1-HDL依赖的ATP结合盒转运体A1（ABCA1）介导的胆固醇溢出能力进行探讨。
　　研究对象和方法:
　　1、病例筛选：通过招募泰安市某社区68名高胆固醇血症患者（40–60岁）作为受试者，入选标准：TC>5.18mmol／L和/或LDL-C≥2.59mmol／L，并排除继发性高胆固醇血症及患有不适宜参与实验的疾病。受试者于受试前3个月开始停服调脂药及有类似功效的保健食品。在整个试验过程中保持生活方式及饮食结构不变。
　　（安慰剂组）和实验组（富氢水组），每组各34例。试验周期为10周。富氢水组每人每日饮富氢水900mL，安慰剂组每人每日饮安慰剂纯净水900mL，每日三次，每次300ml。血样采集时间为实验开始前1天和实验结束时。
　　3、采集患者空腹血，自动生化分析仪器检测血浆TC，甘油三酯（TG），HDL、LDL、VLDL的水平；采用酶法测定血浆葡萄糖（GLU）水平；通过ELISA法检测血浆中pre-β1-HDL水平；依据Ly等人的方法检测血浆游离胆固醇（FC）值来估测内源性卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）的水平；通过ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)的含量和对氧磷酶-1（PON-1）活性；通过分光光度法测定血浆中丙二醛（MDA）的含量；通过ELISA法对血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的浓度进行检测；通过密度梯度离心法分离血脂；通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）来检测血浆中鞘氨醇-1-磷酸（S1P）和HDL中神经酰胺的含量；通过同位素H3检测HDL对细胞内胆固醇流出的影响；通过铜离子诱导的LDL来评价HDL的抗氧化功能；采用MTT法和流式细胞仪法测定 HDL抑制细胞凋亡的功能；通过蛋白质印迹法（Western blot）分析细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）、及β肌动蛋白（β-actin）抗体的表达；通过Western blot法检测血浆载脂蛋白ApoB-100、ApoA-1、ApoM抗体的表达。
　　结果:
　　与安慰剂组相比，富氢水组血浆pre-β1-HDL水平显著升高（P<0.05）；血浆TC与LDL-C水平有下降趋势，HDL水平没有变化；富氢水组HDL明显促进ATP结合盒转运体A1（ABCA1）介导的胆固醇溢出（P<0.05）；富氢水干预使HDL的其他功能得到显著改善：抑制LDL的氧化（P<0.05），抑制氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的单核细胞向内皮细胞的粘附，抑制ox-LDL诱导的内皮细胞的凋亡；Western blot分析表明血浆载脂蛋白ApoB-100显著降低（P<0.05），ApoM显著增加（P<0.01）；饮氢气水后血浆和HDL中炎症及氧化应激指标显著减少（P<0.05或 P<0.01）。
　　结论:
　　通过本课题研究得出如下结论：
　　1、富氢水明显降低高胆固醇血症患者血脂水平；
　　2、富氢水显著改善高胆固醇血症患者血浆载脂蛋白的水平；
　　3、富氢水明显增加高胆固醇血症患者pre-β1-HDL水平和ABCA1依赖的胆固醇溢出；
　　4、富氢水显著改善HDL的其他功能：抗炎症、抗氧化、抗凋亡。

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封面

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中文摘要

英文摘要

符号说明

前言

实验对象与材料

1、研究对象

2、高胆固醇血症患者的入选和排除标准

3、富氢水的来源

4、实验细胞系的来源

5、试剂及试剂盒

6.主要仪器设备

7、主要溶液配方

方法

1、社区人群干预

2、实验室研究

3、统计学方法

结果

1、受试者的一般情况

2、富氢水对Pre-β1-HDL水平和LCAT活性的影响

3、富氢水对血浆脂蛋白含量及组成成分的影响

4、富氢水对血浆抗氧化指标和氧化应激指标的影响

5、富氢水的干预对HDL 功能的影响

讨论

1、富氢水对高胆固醇血症患者血血脂代谢的影响

2、富氢水对血浆pre-β1-HDL及LCAT活性的影响

3、富氢水干预后的HDL能促进ABCA1介导的胆固醇逆向转运

4、富氢水提高HDL其他功能

5、富氢水对血浆炎症及抗氧化性标志物的影响

6、研究的局限性

结论

附图

参考文献

综述: 富氢水抗组织器官氧化应激研究进展

致谢

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