湖南和广西两省区猪圆环病毒2型的PCR检测和流行毒株全基因组的克隆测序及分析

摘要

猪圆环病毒2型(PCV-2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等相关疾病的重要病原。本文采用PCR技术，对2006-2007年我国广西和湖南省区的PCV-2流行情况进行了检测和病毒全基因组克隆测序及分析。 本研究对采集于我国广西和湖南等地的301份(广西140份，湖南161份)猪高热综合征病料进行了圆环病毒2型的PCR检测，共检出PCV-2阳性121例，其中广西54例PCV-2阳性率为38.5％；湖南67例，阳性率为41.6％，证明我国广西湖南两地：PCV-2感染较严重，PCV-2是导致猪高热综合征的一个重要病原。 本研究采用PCR技术分段扩增的方法，扩增来自广西和湖南的PCV-2病毒基因组核苷酸序列，进行克隆测序；测序结果用DNASTAR软件进行序列拼接和分析，共得到病毒的全基因核苷酸序列24株，各毒株的核苷酸序列均为1767bp。 通过流行毒株的基因序列分析发现，本试验获得的24个毒株的核苷酸序列同源性在96.0％～100％之间，各毒株的ORFl同源性很高(97.1％～100％)，而ORF2的同源性相对较低(93.3％～98.6％)，病毒基因组的变异主要由ORF2基因的变异所致，两省区的毒株在核苷酸序列的同源性上无明显的地理差异。各毒株在基因进化树上同处在属于PCV-2的分支内，均为PCV-2，而且分处在PCV-2的两个较大分支内；其中GXll03、HUN321、HUN377、HUN432等4个毒株同处在PCV-2的一个小分支，其余20株处在另一个小分支；各毒株与加拿大、美国、欧洲和亚洲其它国家的PCV-2代表株有很近的亲缘关系。

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第一章猪圆环病毒2型感染的研究进展

1.1 PCV的起源与演化

1.2 PCV-2的分子生物学特性

1.3 PCV-2的转录与复制

1.4 PCV-2的宿主

1.5 PCV-2的传播和维持

1.6 PCV-2与相关疾病的关系

1.6.1 PMWS

1.6.2PDNS

1.6.3PRDC

1.6.4 CT

1.6.5PNP

1.7 PCV-2的流行和分布状况

1.8本研究的目的与意义

第二章2007年广西和湖南两省区猪圆环病毒2型的PCR检测

2.1材料与方法

2.1.1 PCV-2病料样品采集

2.1.2分子生物学试剂

2.1.3病料的处理

2.1.4 DNA模板的制备

2.1.5引物设计及特异性实验

2.1.6 PCR扩增

2.1.7琼脂糖凝胶电泳

2.2结果与分析

2.2.1引物的特异性实验

2.2.2样品检测结果

2.3讨论

第三章湖南和广西两省区PCV-2流行毒株全基因组的克隆与测序分析

3.1材料与方法

3.1.1样品的来源

3.1.2主要试剂及仪器

3.1.3.引物设计

3.1.4.PCR扩增

3.1.5琼脂糖凝胶电泳检测

3.1.6 PCR扩增产物的回收、

3.1.7克隆与测序

3.2结果与分析

3.2.1扩增结果

3.2.2 PCR鉴定

3.2.3序列测定结果

3.2.4序列分析

3.3讨论

结论

参考文献

附录

致谢

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