K562细胞增殖与损伤过程中[Ca]的荧光检测分析

摘要

Ca<'2+>是细胞内重要的信息载体之一,在细胞生命活动中扮演着极其重要的角色.外源信号可以引起细胞胞浆钙离子浓度([Ca<'2+>]<,i>)的时空变化,形成钙信号,激发一系列细胞内事件的发生,最终完成其特定的生理功能.所以,研究钙信号与细胞生命活动的关系,尤其是与肿瘤细胞增殖、损伤或凋亡的关系,以及物理因素(磁场、射线等)作用下肿瘤细胞[Ca<'2+>]<,i>的变化,对于研究肿瘤细胞生物学和磁场生物效应具有重要的研究价值和现实意义.该论文对人肿瘤细胞系K562[Ca<'2+>]<,i>进行比率荧光检测,研究了该细胞系在增殖和损伤过程中[Ca<'2+>]<,i>变化以及稳恒磁场对其[Ca<'2+>]<,i>的影响.主要工作内容包括:1.建立了采用比率荧光显微法检测细胞内钙离子浓度的实验系统,完善了实验设备,并对系统的可靠性进行了相关检测分析.对K562细胞[Ca<'2+>]<,i>进行了比率荧光检测,发现增殖细胞群体中胞浆[Ca<'2+>]<,i>存在着明显差异.2.对K562细胞进行同步化处理并跟踪检测了K562细胞增殖过程中不同周期时相[Ca<'2+>]<,i>变化,结果显示S期细胞[Ca<'2+>]<,i>保持较低水平,在细胞分裂前后(M期)出现较大波动,表明[Ca<'2+>]<,i>升高可能引发细胞分裂过程的启动和完成.3.建立了紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡的经典模型,并在不同时间对各浓度紫杉醇作用下HL-60细胞的[Ca<'2+>]<,i>进行了检测,结果显示细胞[Ca<'2+>]<,i>升高可能是细胞凋亡的上游信号.4.采用9mT稳恒磁场对K562细胞进行处理并跟踪检测其[Ca<'2+>]<,i>的变化,结合细胞周期[Ca<'2+>]<,i>变化及流式细胞分析等实验结果,证实长时间的连续曝磁会抑制肿瘤细胞的生长,磁场处理下连续曝磁时细胞[Ca<'2+>]<,i>升高应该是其死亡信号.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明

第一章引言

1.1研究目的及意义

1.2主要研究内容

参考文献

第二章相关生物学背景及[Ca2+]检测技术简介

2.1相关生物学背景知识

2.1.1细胞钙信号(Calcium Signals)的特点及功能

2.1.2细胞增殖(Cell Proliferation)

2.1.3细胞凋亡(cell apoptosis)

2.2钙离子浓度的检测技术简介

2.2.1整体钙离子水平测定方法

2.2.2细胞内钙离子浓度测定方法

参考文献

第三章比率荧光法检测K562细胞静息状态[Ca2+]i

3.1比率荧光测量原理

3.1.1荧光的产生与荧光光谱特点

3.1.2比率荧光测量原理

3.2实验材料

3.2.1实验细胞及其培养

3.2.2实验用试剂及配制

3.3比率荧光法检测细胞[Ca2+]i实验系统

3.3.1实验系统介绍

3.3.2实验系统参数

3.3.3实验系统应用软件.

3.3.4系统改进——温控器和样品室的制作

3.3.5系统可靠性的相关检测分析

3.5比率荧光法检测悬浮培养细胞[Ca2+]i的实验流程

3.6实验数据处理及结论

参考文献

第四章K562细胞增殖过程中[Ca2+]i的测定

4.1 K562细胞的同步化实验

4.1.1实验原理与实验流程

4.1.2 K562细胞同步化处理的结果分析

4.2不同周期时相的K562细胞[Ca2+]i检测

4.2.1实验方案

4.2.2实验结果分析

参考文献：

第五章紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中[Ca2+]i的测定

5.1紫杉醇诱导的HL-60细胞凋亡模型

5.2HL-60细胞凋亡过程中形态学观察及[Ca2+]i的检测

5.2.1实验方案与流程

5.2.2实验结果及分析

参考文献：

第六章稳恒磁场对K562细胞[Ca2+]i的影响

6.1磁场参数的筛选——稳恒磁场处理后K562细胞的MTT测试实验

6.1.1磁场处理系统

6.1.2磁场处理肿瘤细胞的参数筛选

6.2稳恒磁场对K562细胞[Ca2+]i影响的实验

6.2.1实验方案

6.2.2实验流程

6.2.3实验结果

6.3稳恒磁场处理后K562细胞的LCM检测实验

参考文献

第七章总结

参考文献

附录

致谢