大鼠室下区神经干细胞培养技术的建立及BME对其自然分化的影响

摘要

该实验利用倒置显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪等实验仪器,采用免疫荧光法、免疫细胞化学方法、流式细胞检测技术、MTT比色检测技术,并借助二巯基乙醇(β-mercaptal ethanol,BME)作为诱导干预因素,从胚胎大鼠脑室下区分离培养、鉴定神经干细胞,并观察其向神经元的自然分化及BME诱导分化情况,试图为阐明神经干细胞的分化机制提供一条新的思路.该次实验结论:(1)所得到的细胞克隆经mestin免疫荧光染色及分化后细胞的NSE、GFAP、GalC免疫细胞化学染色,鉴定为神经干细胞,可认为在该实验室建立了大鼠神经干细胞体外培养模型.(2)10μM BME处理组、100μM BME处理组与对照组相比对细胞活性无明显影响,而500μM BME处理组则较对照组细胞活性显著下降(P<0.05),1mM BME处理组和5mM BME处理组基本上神经干细胞不能存活.(3)神经干细胞在自然分化条件与100μM BME诱导条件下分化8d后神经元所占比例分别为31.6﹪和32.3﹪,两者之间无明显差别(P>0.05),由此可得出结论100μM BME对于神经干细胞向神经元的分化无明显作用.

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缩略词表

摘要

Abstract

文献回顾

一.神经干细胞的发生、分化、特点和定位

二.神经干细胞培养方法

三.永生化神经干细胞

四.神经干细胞的应用

五.影响神经干细胞分化的因素

六.神经干细胞分化的分子机制

七.BME对细胞的生物学作用

实验一胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及鉴定

材料

方法

结果

讨论

实验二神经干细胞的自然分化及BME诱导分化

材料

方法

结果

讨论

结 论

参考文献

致 谢

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