未成熟树突状细胞局部回输治疗诱导同种异体复合组织移植耐受的研究

摘要

近年来,随着新型免疫抑制药物的问世及组织配型技术的精进,移植外科发展迅猛,整形外科医生也加强了在异体复合组织移植领域的探索。然而,CTA移植的发展远远滞后于内脏器官移植,究其根本,是因为其组分复杂,抗原性不均一。自1998年Dubernard首次成功实施手移植以来,截止07年全球已完成20例手移植,8例换脸。据文献回顾,法国的第一例CTA受者在术后发生过2次急性排斥反应,本研究所实施的第二例患者也发生了3次急排。在加大免疫抑制剂用量后,排斥反应均得到控制,但代价却是各种棘手的并发症,急性肾衰、高血压症、高血糖、白细胞减少症等等。因此,如何最小化免疫抑制剂应用的风险,已成为CTA移植领域的重中之重。异体复合组织移植排斥反应的发生遵循着免疫应答的一般规律,即首先对外来的同种异体抗原进行免疫识别,继而进入活化阶段,最终产生对移植物的免疫排斥,因此,选择性阻断其中任一环节,均有可能诱导移植免疫耐受。树突状细胞是最主要的抗原提呈细胞,其表面高水平表达MHC-II类分子以及共刺激分子CD80、CD86,通过第二信号刺激途径,激活初始T细胞。但是在它成熟之前,这些分子呈低表达,以吞噬功能为主,提呈功能为辅,甚至可以诱导T细胞凋亡或者无能。因此,未成熟树突状细胞是细胞回输治疗方案理想的备选细胞。
　　目的:利用CTA移植物位于体表,耐缺血时间长的优势,利用术中、术后两个时间窗,提出局部细胞治疗诱导免疫耐受的新理念,降低全身免疫抑制剂应用为同种异体复合组织移植带来的风险。
　　方法:1.贴壁培养法体外诱导未成熟树突状细胞,进行形态学鉴定、活性及表型鉴定,最后通过体外鉴定其免疫学功能。2.体内试验分别研究供、受双方来源的imDC,局部回输或联合应用低剂量雷帕霉素对异体皮瓣存活的影响。
　　结果:1.光镜可见细胞呈葡萄串样生长,电镜下可看到细胞表面皱褶多、短刺状突起少,胞内可见丰富的细胞器及吞噬泡。活细胞率(91.13±1.25)％,纯度(61.10±1.47)％,OX62阳性细胞表面CD80、86、MHC II呈低表达。抑制功能试验表明imDC不具备直接刺激T细胞活化扩增的能力。单向混合淋巴细胞反应,观察到imDC下调了T细胞活化扩增的能力。2.供体imDC回输组最先发生急排,病理分析符合急排的病理特点。受体imDC回输联合低剂量雷帕霉素用药后,皮瓣成活期延长至20余天,较雷帕霉素单独处理组长,病理分析见皮肤、皮下以及血管周围组织炎性细胞浸润均明显增多。排斥终点各组受鼠脾脏、淋巴结内Treg含量检测,供体imDC回输组最低,受体imDC回输联合雷帕霉素组最高,但均较正常组明显降低,与排斥发生急缓呈现良好的相关性。
　　结论:1.体外诱导的未成熟树突状细胞具备低免疫原性,可下调T细胞的活化增殖。2.受体imDC联合低剂量雷帕霉素用药可延长异体皮瓣存活时间,可能与刺激Treg体内扩增有关,为今后自体imDC及Treg联合回输奠定了基础。

目录

缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

正文

实验一 大鼠未成熟树突状细胞的体外诱导及鉴定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 大鼠未成熟树突状细胞局部回输在异体复合组织移植中应用

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢