凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)工厂化养殖中添加甘蔗渣对水质、细菌区系及对虾消化酶和免疫酶活力的影响

摘要

本论文通过对对虾工厂化养殖池塘添加蔗渣后,水体理化因子变化、养殖对虾消化和免疫酶活力的研究,综合利用平板计数法、流式细胞仪计数法、Biolog微平板分析法、变形凝胶电泳(DGGE)等方法,对添加蔗渣养殖池塘和未添加蔗渣养殖池塘系统内水体、蔗渣附着及对虾肠道内细菌的组成、数量变化及群落功能进行了研究,阐明添加蔗渣对对虾养殖的影响及作用机制和原理。研究主要取得以下结果:
　　1.添加不同量的甘蔗渣(0,0.5kg/m2,1kg/m2)对凡纳滨对虾的影响:
　　添加蔗渣有利于水体细菌的繁殖及生物絮团的产生,在养殖中后期细菌数量:添加1kg/m2蔗渣组＞添加0.5kg/m2蔗渣组＞空白组;在减少47％换水量的前提下,有效地控制水体氨氮和亚硝氮的含量,养殖水体氨氮、亚硝氮呈先升后降的趋势,且蔗渣组含量总体低于空白组,硝氮和COD含量蔗渣组要高于空白组;叶绿素a和无机磷呈波动上升趋势。由于空白组养殖后期发病,对虾溶菌酶活力和抗菌酶活力:添加1.kg/m2蔗渣组＜添加0.5kg/m2蔗渣组＜空白组,而酚氧化酶、超氧化物歧化酶和血清过氧化物酶活力:添加1kg/m2蔗渣组＞添加0.5kg/m2蔗渣组＞空白组;添加0.5kg/m2蔗渣组与添加1kg/m2蔗渣组产量要比空白组分别高出8.7％和14.9％。实验结果表明,每平米甘蔗渣的添加量为1kg效果更为理想。
　　2.添加蔗渣(1kg/m2)对凡纳滨对虾消化和免疫酶活力和生长的影响:
　　蔗渣组肝胰脏淀粉酶、肝胰脏胰蛋白酶和肠道胰蛋白酶活力显著高于空白组(P＜0.05),而肠道淀粉酶活力空白组显著高于蔗渣组(P＜0.05);溶菌酶活力和酚氧化酶活力蔗渣组显著高于空白组蔗渣组(P＜0.05),而血清过氧化物酶和抗菌酶活力蔗渣组略低于空白组,且差异不显著(P＞0.05);对虾产量蔗渣组比空白组高出6％,实验结果表明添加甘蔗渣能有效提高凡纳滨对虾消化力和免疫力,并促进对虾生长。
　　3.添加蔗渣(1kg/m2)对凡纳滨对虾养殖系统内细菌组成、数量变化及群落功能的影响:
　　蔗渣组与空白组总菌、可培养异养菌数量随养殖进行不断增多,蔗渣组总菌、可培养异养菌显著多于空白组,而弧菌数蔗渣组要低于空白组。由Biolog微平板分析法得知,在养殖前后期AWCD对比中,蔗渣附着菌、蔗渣组水体细菌AWCD值显著增变人,说明添加蔗渣后水体细菌和蔗渣附着菌对碳源的整体利用能力及细菌活性显著提高,蔗渣组水体细菌Shannon多样性指数略低于空白组,这一现象在DGGE菌群多样性结果中加以验证。作者认为添加蔗渣组养殖后期某菌落发展为优势种,伎种群多样性有所下降。DGGE图谱基因测序比对结果显示,养殖水体中细菌主要为放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes),其中变形菌门和拟杆菌门为优势菌群。随养殖的进行,细菌群落结构产生了差异,放线菌门细菌逐步衰退,α-变形菌纲、红杆菌科细菌(光能异养菌,多用与高浓度污水的处理),在养殖中后期逐渐发展成优势菌群,特别是在添加蔗渣组效果更加明显,说明添加蔗渣可有效促进此类细菌的繁殖,使养殖环境具有更强的自净能力,为对虾的生长提供良好的环境。
　　4.添加蔗渣(1kg/m2)对凡纳滨对虾抗病力的影响:
　　通过人工注射感染WSSV病原体,从半致死时间来看,蔗渣注射组半致死时间为102h,空白注射组为96h;实时定量PCR监测对虾鳃组织病毒含量结果显示,蔗渣注射组死亡对虾鳃丝组织内病毒绝对含量为1.78×108copy/mg-tissue,空白注射组死亡对虾鳃丝组织内病毒绝对含量为8.45×107copy/mg-tissue,说明蔗渣组对虾可以在更高的病毒含量下存活,证明添加蔗渣池塘饲养的对虾具有更强的抗病力。