血红牛肝菌与褐圆孔牛肝菌次生物质对酚氧化酶的活性研究

摘要

高等真菌是“创造系数”很高的生物资源，它们所含的次生代谢产物化学结构多样且新颖。这种化学结构的多样性对于现代医药和农药先导化合物的发现至关重要。为了筛选具有生物活性的先导化合物和先导结构，本论文对血红牛肝菌(Boletus rubellus Krombh)和褐圆孔牛肝菌(Gyropouscastaneu)两种高等真菌的化学成分进行了研究。 酚氧化酶(Phenoloxidase，PO)又称酪氨酸酶(Tyrosinase)，是结构复杂的多亚基的含铜氧化还原酶。它广泛存在于动物、植物和微生物等生物体内，与人体的衰老、伤口愈合、果蔬的褐变等有密切关系。在昆虫体内，它是一种非常重要的酶类，在昆虫的变态发育和免疫系统中起着极其重要的作用。由于酚氧化酶具有重要的理论意义和发展前景，大量的研究工作集中在此领域。 本文研究了两种高等真菌的化学成分，同时采用本人及课题组其他成员所自主分离鉴定的8种化合物为效应物，测定了它们对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用，具体研究结果如下： 1.利用现代提取分离、波谱技术(MS、1D&2D-NMR、IR和UV)及化学方法共分离15个化合物，其中已鉴定了5个，包括2个甾体，1个神经酰胺类化合物，3-吡啶甲酸和D-阿洛醇，正在结构鉴定中的两个三萜类化合物有望为新颖结构。 2.对本人及课题组分离鉴定的8个化合物进行了酚氧化酶抑制活性研究，8个化合物分别为：甾体类化合物I和II，倍半萜化合物Ⅲ、IV和V，芳香族化合物VI、黄酮苷类化合物Ⅶ和三萜类化合物类化合物VⅢ，活性测试结果显示8个化合物均表现出不同程度的酚氧化酶抑制活性，化合物I-VⅢ的IC50依次为4.5 mmol/L、4.3 mmol/L、3.08 mmol/L、0.55 mmol/L、3.88 mmol/L、2.04 mmol/L、0.83 mmol/L和0.32 mmol/L。

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第一章综述

1.1高等真菌化学成分及活性研究进展

1.1.1倍半萜类化合物及活性研究进展

1.1.2二萜类化合物及活性研究进展

1.1.3三萜类化合物及活性研究进展

1.1.4甾体类化合物及活性研究进展

1.1.5非蛋白氨基酸及肽类化合物

1.1.6醌类化合物

1.1.7联苯类化合物

1.1.8生物碱类化合物

1.1.9脂肪酸类化合物

1.1.10核苷类化合物

1.2酚氧化酶(phenoloxidase，PO)研究进展

1.2.1 PO的分布

1.2.2 PPO的激活

1.2.3 PPO的克隆

1.2.4 PO的生理功能

1.2.5 PO抑制剂的研究

1.2.6 PO的应用前景

1.2.7酚氧化酶活性中心的结构

1.2.8酚氧化酶的催化活性

1.2.9酚氧化酶的分子生物学研究

1.3本研究的目的与意义

第二章两种高等真菌的化学成分

2.1血红牛肝菌的化学成分

2.1.1前言

2.1.2 实验材料

2.1.3实验仪器

2.1.4实验试剂

2.1.5提取与分离

2.1.6化合物理化性质及波谱数据

2.1.7结论与讨论

2.2褐圆孔牛肝菌的化学成分

2.2.1前言

2.2.2实验材料

2.2.3实验仪器

2.2.4实验试剂

2.2.5提取与分离

2.2.6化合物理化性质及波谱数据

2.2.7结论与讨论

第三章酚氧化酶活性筛选

3.1引言

3.2供试药品、试剂及主要仪器

3.2.1主要化学药品和生化试剂

3.2.2主要仪器

3.3标准试虫及饲养

3.3.1甜菜夜蛾人工饲料的配方及制作方法

3.3.2甜菜夜蛾的人工繁殖与饲养

3.4酚氧化酶活性测试

3.4.1试剂配置

3.4.2酶液制备

3.4.3酶活性测定

3.5结论与讨论

参考文献

附图

致谢

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