花生条纹病毒分子变异分析和马铃薯Y病毒蛋白的表达纯化

摘要

山东是我国花生生产和出口大省,常年种植面积大约1300万亩。花生病毒的发生严重制约着花生产量和品质的提高,进而影响了花生的生产和出口创汇。
　　 本研究用RT-PCR方法从2008年-2009年在山东各地采集的153个疑似病毒病的花生样品中,检测到花生条纹病毒(Peanut stripe virus,PStV)、黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic virus,CMV)和花生斑驳病毒(Peanut mottle virus,PeMoV)三种病毒。其中PStV的发生最广,在山东各花生产区均有发生,检出率最高为48.4％。其次为CMV,CMV检出率为19.0％。CMV与PStV多复合侵染,复合侵染率为9.2％。PeMoV仅在青岛地区发现。
　　 扩增了74个PStV分离物基因组3'-端1082 bp的片段。该片段包括部分Nib编码序列(129 bp),完整的外壳蛋白(coat protein,CP)编码序列(864.bp)和3'端非编码序列(89 bp)。序列分析发现,74个PStV山东分离物CP基因核苷酸一致率为98.0％～100％,氨基酸一致率为98.3％～100％,与其它36个分离物的核苷酸和氨基酸一致率分别为93.5％～100％和92.0％～100％。系统进化分析表明,PStV分离物可以分为和地理来源相关的两个组:第Ⅰ组包括美国、中国和印尼分离物,其中美国和中国大陆分离物形成IA亚组,印尼分离物属于IB亚组;第Ⅱ组主要由越南、泰国和中国台湾的分离物组成。种群统计分析显示,同一国家的PStV种群基因交流频繁,而不同国家的PStV种群间基因交流不频繁;PStV种群在中国呈扩张趋势。
　　 根据PStV、CMV和PeMoV基因组特点,构建了针对这三种病毒的RNAi植物表达载体。
　　 本研究成功表达了马铃薯Y病毒(Potato virusy,PVY)11个蛋白中的10个,用于蛋白的功能和晶体结构的研究。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:附号说明

1.前言

1.1 花生和花生病毒病

1.1.1 花生的经济重要性

1.1.2 花生病毒概况

1.1.3 我国几种重要的花生病毒概况

1.2 花生条纹病毒

1.2.1 花生条纹病毒的定名

1.2.2 花生条纹病毒的生物学特征

1.2.3 花生条纹病毒的分子生物学特征

1.3 植物病毒的遗传变异和进化分析

1.3.1 植物病毒的变异

1.3.2 序列分析

1.4 花生抗病毒基因工程

1.5 Potyviruses基因组结构和功能

1.6 Potyvimses蛋白的原核和真核表达

1.6.1 蛋白的原核表达

1.6.2 Potyviruses蛋白的真核表达

1.7 本研究的居的意义

2.花生病毒的检测和花生条纹病毒分子变异分析

2.1 材料和方法

2.1.1 材料

2.1.2 方法

2.2 结果与分析

2.2.1 山东花生病毒RT-PCR检测结果

2.2.2 山东花生产区样品检测结果

2.2.3 核苷酸序列测定

2.2.4 序列一致率分析

2.2.5 系统发育关系分析

2.2.6 核苷酸多样性分析

2.2.7 重组分析

2.2.8 基因流和遗传分化分析

2.2.9 种群统计分析

2.2.10 RNA沉默植物表达载体的构建

2.3 结论与讨论

3.马铃薯Y病毒蛋白的表达和纯化

3.1 材料与方法

3.1.1 实验材料

3.1.2 实验方法

3.2 结果与分析

3.2.1 分离物基因的扩增与克隆

3.2.2 原核表达载体的构建

3.2.3 PVY蛋白的表达

3.2.4 部分蛋白的纯化

3.3 结论与讨论

全文结论

参考文献

致谢

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