鸭甲肝病毒3型QZ1401株全基因组序列分析及部分毒力研究

摘要

鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus，DHAV）及鸭星状病毒(Duck astrovirus)导致的鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH)，主要感染1～3周龄雏鸭，具有高度致死、传播迅速的特点。其中DHAV型鸭肝炎呈世界范围分布，给养鸭业带来极大的损失。为深入了解DHAV-3基因组变异情况，本研究对分离自山东青州的DHAV-3分离株QZ1401进行了全基因组序列测定及分析，对其部分毒力开展了研究。本研究主要内容包括以下两方面:
　　1、DHAV-3山东青州分离株QZ1401的全基因组测序及结果分析
　　本研究通过对DHAV-3青州分离株QZ1401进行分段RT-PCR扩增、测序及拼接，最终得到其全基因组序列，分析其全基因组结构，结果表明:QZ1401株的基因组结构为5'UTR-L-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3'UTR;QZ1401株与其他GeneBank中登录的DHAV-3毒株存在很高的同源性，全基因组核苷酸同源性为92.7％～99.4％，编码区的氨基酸序列的同源性为96.5％～99.7％，属同一血清型;系统进化树分析结果表明，22株DHAV-3可分为两个基因型: GⅠ型和GⅡ型。所有中国分离野毒株（除中国疫苗株B63）均属于GⅠ型;韩国分离野毒株（包括高致病力毒株和低致病力毒株），越南分离野毒株以及中国疫苗株B63属于基因Ⅱ型（GⅡ型）。其基因分型呈现明显的地域特征，与病毒毒株的分离时间等无明显相关性。
　　2、QZ1401株毒力研究
　　本研究将盲传到第五代的病毒尿囊液分别通过尿囊腔接种法及肌肉注射法接种到鸭胚及雏鸭，统计其在规定时间内的死亡数，通过Reed-Muench方法计算鸭胚的ELD50及雏鸭的LD50，来测定QZ1401株毒力大小。结果显示:该毒株接种鸭胚和雏鸭后，可导致其死亡并表现出典型的鸭病毒性肝炎症状，毒力指标显示QZ1401株DHAV-3为一株强毒，其中，ELD50为5-3.75/0.2mL，LD50为2-5.18/0.5mL。

目录

声明

符号说明

摘要

1 前言

1．1 鸭甲肝病毒的概述

1．1．1 鸭甲肝病毒的分类地位

1．1．2 DHAV研究的发展史

1．2 DHAV的生物学特性

1．2．1 DHAV的结构特征及抵抗力

1．2．2 DHAV的致病性

1．2．3 DHAV的培养特性

1．3 DHAV-1分子生物学研究进展

1．3．1 DHAV-3基因组结构

1．3．2 DHAV-3功能蛋白作用及其特性

1．4 DHAV的流行病学

1．5 DHAV的预防与治疗

1．5．1 DHAV的预防

1．5．2 治疗

1．6 本研究目的意义

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 菌(毒)株

2．1．2 试验动物

2．1．3 酶和相关试剂

2．1．4 主要仪器

2．1．5 实验所用的溶液及其配制

2．1．6 全基因组扩增引物的设计与合成

2．2 方法

2．2．1 QZ1401株DHAV-3的分离培养以及全基因组测序

2．2．2 QZ1401株DHAV-3的毒力测定

3 结果与分析

3．1 QZ1401株DHAV-3全基因组测序的结果分析

3．1．1 目的片段扩增结果

3．1．2 QZ1401株DHAV-3全基因组结构测序结果拼接与同源性分析

3．1．3 氨基酸进化树的构建与分析

3．1．4 VP1高变区氨基酸序列分析

3．2 毒力检测的结果

3．2．1 鸭胚半数致死量

3．2．2 雏鸭半数致死量

4 讨论

4．2 QZ1401株全基因组测序及分析

4．2 毒力测定

5 结论

参考文献

致谢