苹果多酚对乙醇所致小鼠DNA损伤的保护作用

摘要

乙醇引起的DNA氧化损伤可能引发多种病变甚至癌变。应用抗氧化剂消除乙醇引起的过量自由基生成，提高机体对过量自由基的耐受能力，可以在一定程度上防止乙醇引起DNA氧化损伤，对机体起到一定的保护作用。苹果多酚是苹果中存在的一类重要生物活性物质。研究发现，苹果多酚具有清除自由基、抗氧化、抗突变和抗癌、抑制血压上升等作用。 本实验室前期研究结果表明，苹果多酚在体外具有较强的抗氧化活性并且对乙醇引起的小鼠肝损伤起到保护作用。基于此，本论文全面系统考察苹果多酚对乙醇引起的小鼠多组织器官DNA损伤的保护作用及其机制，以期为将苹果多酚的应用开发提供理论及实验依据。 首先，本论文采用碱性单细胞凝胶电泳技术(SCGE)，考察了乙醇对小鼠肝细胞和心肌细胞DNA的影响。结果表明，乙醇(5.0g/kg，i．p.，2.5g/kg，i．p.)可以显著引起小鼠肝细胞和心肌细胞DNA损伤，并且乙醇导致的小鼠肝细胞和心肌细胞DNA损伤可以在给乙醇后24h完全修复。同时，考察苹果多酚对乙醇引起的小鼠外周血细胞、脑细胞(小脑、海马)、肝细胞和心肌细胞DNA损伤的保护作用。结果表明，苹果多酚200、400、800mg/kg灌胃给药1天，50、100、200、400、800mg/kg连续灌胃给药3天可对乙醇(5.0g/kg，i．p.)引起的小鼠外周血细胞DNA损伤产生保护作用。苹果多酚100、200、400、800mg/kg灌胃给药1天，50、100、200、400、800mg/kg连续灌胃给药3天可对乙醇(5.0g/kg，i．p.)引起的小鼠小脑细胞DNA损伤产生保护作用，苹果多酚50、100、200、400、800mg/kg灌胃给药1、3天均可对乙醇引起的小鼠海马细胞DNA损伤产生保护作用。苹果多酚50、100、200、400、800mg/kg连续灌胃给药1、3天均可对乙醇(5.0g/kg，i．p.)引起的小鼠肝细胞和心肌细胞DNA损伤产生保护作用。上述结果提示，苹果多酚单次给药和多次给药均对乙醇引起的小鼠外周血细胞、脑细胞(小脑、海马)、肝细胞和心肌细胞DNA损伤具有一定的保护作用。 此外，本论文还考察了苹果多酚对乙醇引起原代培养的大鼠小脑颗粒细胞DNA损伤的保护作用。实验结果表明，苹果多酚(10，1，0.1μg/mL)作用6h对乙醇(100mM)所引起大鼠小脑颗粒细胞DNA损伤具有保护作用，提示苹果多酚直接作用于大鼠小脑颗粒细胞对乙醇引起的神经元DNA损伤具有保护作用。 为了初步探讨苹果多酚的作用机制，本论文进一步应用HPLC-ECD来检测苹果多酚对乙醇引起的小鼠尿液中8-OHdG含量变化的影响，应用Western-blotting方法考察苹果多酚对小鼠各组织器官中OGG1蛋白表达的影响。结果显示，乙醇(5.0g/kg，i．p.)可引起的小鼠尿液中8-OHdG生成的增加，此作用可以被苹果多酚400mg/kg灌胃给药1、3天所抑制；苹果多酚400mg/kg灌胃给药1、3天均具有增强乙醇引起的小鼠各组织器官中OGG1蛋白表达增加的趋势，提示苹果多酚可以抑制乙醇引起的DNA氧化损伤，提高机体对DNA氧化损伤的修复能力。 综上所述，苹果多酚对乙醇引起的多组织器官DNA损伤具有显著的保护作用，提示苹果多酚可能具有预防和治疗乙醇损伤相关疾病的潜力。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词表

声明

前 言

实验材料与方法

一、实验材料

1.实验动物

2.药品与试剂

3.实验器材

二、实验方法

1.给药方案

2.单细胞凝胶电泳技术

3.原代大鼠小脑颗粒细胞的培养

4.细胞存活率的测定

5.应用HPLC-ECD检测尿液中8-OHdG含量

6.免疫印迹(western-blotting)实验

7.统计学处理

实验结果

1.乙醇对小鼠肝细胞DNA的影响

1.1乙醇对小鼠肝细胞DNA的影响

1.2乙醇引起的小鼠肝细胞DNA损伤的自身修复

2.乙醇对小鼠心肌细胞DNA的影响

2.1乙醇对小鼠心肌细胞DNA的影响

2.2乙醇引起的小鼠心肌细胞DNA损伤的自身修复

3.苹果多酚对乙醇引起的小鼠外周血细胞DNA损伤的保护作用

3.1苹果多酚对正常小鼠外周血细胞DNA的影响

3.2苹果多酚对乙醇引起的小鼠外周血细胞DNA损伤的保护作用

4.苹果多酚对乙醇引起的小鼠脑细胞DNA损伤的保护作用

4.1苹果多酚对正常小鼠脑细胞DNA的影响

4.2苹果多酚对乙醇引起的小鼠脑细胞DNA损伤的保护作用

5.苹果多酚对乙醇引起的小鼠肝细胞DNA损伤的保护作用

5.1苹果多酚对正常小鼠肝细胞DNA的影响

5.2苹果多酚对乙醇引起的小鼠肝细胞DNA损伤的保护作用

6.苹果多酚对乙醇引起的小鼠心肌细胞DNA损伤的保护作用

6.1苹果多酚对正常小鼠心肌细胞DNA的影响

6.2苹果多酚对乙醇引起的小鼠心肌细胞DNA损伤的保护作用

7.苹果多酚对乙醇引起的原代培养的大鼠小脑颗粒细胞DNA损伤的保护作用

7.1苹果多酚对原代培养的大鼠小脑颗粒细胞存活率的影响

7.2苹果多酚对原代培养的大鼠小脑颗粒细胞DNA的影响

7.3苹果多酚对乙醇引起原代培养的大鼠小脑颗粒细胞DNA损伤的保护作用

8.苹果多酚对乙醇引起的小鼠尿液中8-OHdG含量变化的影响

8.1 8-OHdG标准曲线

8.2 HPLC色谱图

8.3苹果多酚对乙醇引起的小鼠尿液中8-OHdG含量变化的影响

9.苹果多酚对乙醇引起的小鼠各组织器官OGG1蛋白表达的影响

9.1苹果多酚单次给药对乙醇引起的小鼠各组织器官OGG1蛋白表达变化的影响

9.2苹果多酚多次给药对乙醇引起的小鼠各组织器官OGG1蛋白表达变化的影响

讨 论

结 论

参考文献

致 谢