羊传染性脓疱病毒分离株B2L基因的克隆与序列分析及PCR诊断方法的研究

摘要

本试验对CEV内蒙古分离株OV/nm-05株进行传代培养，待出现典型的CPE后收毒并进行DNA的提取，根据已发表的CEV B2L基因序列，设计引物，进行B2L基因的特异性扩增，并将其克隆到pMD18-T载体后进行测序。结果表明：OV/nm-05株的B2L基因长为1133bp。核苷酸序列比较、分析结果表明：OV/nm-05株与Strain NZ2同源性最高，达97.9％，与N86.20a最低，为84.2％，说明OV/nm-05株B2L基因与参考毒株之间差异不大。 本试验根据已发表的CEVNZ2株的序列，设计引物，对OV/nm-05株、CPV和新生犊牛睾丸原代细胞的核酸进行PCR扩增，结果表明：只有OV/nm-05株扩增出约440bp左右的特异性片段，其它均为阴性，说明该PCR扩增体系具有良好的特异性。对OV/nm-05株进行敏感性试验，结果表明：该PCR扩增体系可检测出1/1ng模板，说明该PCR扩增体系具有较高的敏感性。

目录

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论文说明：缩略词表

声明

1引言

1.1羊传染性脓疱概述

1.2我国对CE的研究概况

1.3 CEV病原学特征及其研究进展

1.3.1病毒的形态结构

1.3.2 CEV的理化特性

1.3.3 CEV的基因组结构

1.3.4病原性

1.3.5 CEV生物学特性

1.4流行病学

1.4.1 CE的传染源及流行特征

1.4.2传播途径

1.4.3易感动物

1.5致病机理

1.6临床症状及病理变化

1.6.1临床症状

1.6.2病理变化

1.7诊断方法

1.7.1电子显微镜检查

1.7.2分离培养

1.7.3动物接种试验

1.7.4血清学诊断

1.7.5鉴别诊断

1.7.6 PCR诊断方法

1.8免疫学特性及免疫方法研究

1.8.1 CEV的细胞免疫特性

1.8.2 CEV的局部免疫特性

1.8.3 CEV感染或免疫后抗体检测

1.8.4免疫方法

1.9 CE的防制

1.10本研究目的和意义

2试验一CEV内蒙古分离株OV/nm-05株B2L基因的克隆和序列分析

2.1试验材料

2.1.1试验毒株

2.1.2载体、菌株和主要试剂

2.1.3培养基和抗生素

2.1.4试验用犊牛睾丸细胞

2.1.5主要仪器设备

2.1.6引物的设计与合成

2.2试验方法

2.2.1病毒的增殖

2.2.2总DNA的提取

2.2.3 B2L基因的克隆和序列分析

2.3试验结果

2.3.1目的基因的PCR扩增

2.3.2重组质粒鉴定结果

2.3.3重组质粒测序结果

2.3.4 OV/nm-05株B2L基因序列比较分析

2.4讨论

3试验二CEV PCR诊断方法的研究

3.1试验材料

3.1.1试验毒株

3.1.2主要试剂

3.1.3主要仪器设备

3.1.4引物的设计和合成

3.2试验方法

3.2.1病毒的增殖

3.2.2模板DNA的制备

3.2.3 DNA含量的测定

3.2.4 PCR扩增

3.2.5特异性试验

3.2.6敏感性试验

3.2.7 PCR产物的电泳检测

3.3试验结果

3.3.1 PCR扩增结果

3.3.2特异性试验结果

3.3.3敏感性试验结果

3.4讨论

4结论

致谢

参考文献

附录

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