福氏志贺氏菌M90T毒力相关膜蛋白复合物组成蛋白基因缺失突变体的构建

摘要

志贺氏菌是引起人类腹泻病常见的病原菌之一，严重影响人们的日常生活，重症者致死。目前由于人们对志贺氏菌的致病机制和宿主的免疫保护机制还不十分清楚，还未研究出非常有效的疫苗，无法有效控制传染。
　　细菌膜蛋白复合物在细菌致病的过程中发挥着重要的作用，而毒力大质粒是志贺氏菌致病的关键，毒力大质粒丢失后志贺氏菌失去致病性，那么野生株和毒力大质粒缺失株的膜蛋白复合物是否存在差异，如果存在差异，差异之处的膜蛋白复合物是否参与志贺氏菌的致病过程或影响志贺氏菌的毒力？本实验室以此为出发点通过BN PAGE，分离了志贺氏菌福氏5型M90T野生株和M90T毒力大质粒缺失株膜蛋白复合物谱，通过比较观察，发现在分子量约290 kDa处有一条野生株特有的条带，此条带经质谱鉴定后，包含由毒力大质粒编码的Apyrase和染色体编码的DnaK、ClpB、GapA、EF-Tu、YdgA6个蛋白质组成。经文献调研，其中Apyrase和DnaK均能影响外膜蛋白IcsA的极性分布和功能，减弱了志贺氏菌的毒力。综合分析，我们推测此复合物的各个蛋白可能共同调节外膜蛋白IcsA的极性分布和功能。
　　为验证我们的推测，本实验采用由Datsenko和Wanner建立的λRed重组系统，成功敲除了apyrase、dnaK、clpB、ydgA及icsA，为下步工作奠定了良好的基础。同时，在构建缺失突变体的过程中，经过摸索优化，掌握了高效、稳定的操作方法。

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插图和附表清单

缩 略 词 表

1 引言

1.1 福氏志贺氏菌感染细胞的过程

1.2 福氏志贺氏菌的TTSS

1.3 非TTSS毒力相关因子

1.4 蛋白质的相互作用

1.5 前期研究和发现

1.6 基因敲除（gene knockout）技术

1.7 本研究的目的和意义

2 基因apy敲除突变体的构建过程和结果分析

2.1 实验材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 小结

3 基因dnaK敲除突变体的构建过程和结果分析

3.1 实验材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 小结

4 基因clpB、ydgA、icsA敲除突变体的构建过程和结果分析

4.1 实验材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 小结

5 结论

6 展望

致谢

参考文献

附录

作 者 简 介