具有抑制娄地青霉的植物乳杆菌的筛选及其在青贮饲料中的应用研究

摘要

本论文以分离自内蒙古、西藏、青海、新疆、甘肃、四川、云南以及蒙古国地区的传统发酵食品中的347株植物乳杆菌为研究对象，采用双层平板点接法筛选能够抑制娄地青霉（Penicillium roqueforti）生长的菌株。对具有优良抑菌活性的菌株进行了抑菌特性和青贮饲料中的应用研究。
　　将347株植物乳杆菌按5％（V/V）接入MRS液体培养基中，在37℃发酵48h后，以其对娄地青霉的抑菌圈大小作为指标，通过双层平板点接法，获得抑菌圈直径均大于25mm的33株植物乳杆菌。对33株具有高抑菌活性植物乳杆菌菌株进行耐酸性、温度适应性、生长速率和产酸速率试验，结果表明：12株植物乳杆菌具有良好的耐酸性，在酸性条件下（pH=2），仍有抑菌活性；IMAU80162、IMAU10380、IMAU10585、IMAU20013和IMAU20020在10、25（常温）、37、45℃均能生长，且在25℃具有较好的抑菌效果；IMAU80162、IMAU10585和IMAU20013不但生长速率快且能够在短时间内大量产酸。综合以上结果，对IMAU80162、IMAU10585和IMAU20013进行了的青贮饲料中应用研究，分别将单一菌种及复合菌种(1:1)以5.301g cfu/g的接种总量发酵饲料，并测定25℃发酵期间（0、1、3、5、7、14、21、28d）青贮饲料pH及饲料中的乳酸菌、酵母菌、霉菌和大肠菌群变化，结果发现：复合菌种发酵组IMAU80162+IMAU10585的乳酸菌活菌数最多，7天时，达到8.98 lg cfu/g；复合菌种发酵组IMAU10585+IMAU20013乳酸菌生长速度最快，在第三天就达到了最大值，为8.34 lg cfu/g；发酵28天时，各试验组的霉菌、酵母菌和大肠杆菌活菌数均显著低于对照组(P<0.05)，其中IMAU80162+IMAU20013、IMAU10585+IMAU20013和IMAU10585分别对霉菌、酵母菌、大肠杆菌的抑制效果最佳；试验组的pH值下降速度快于对照组，其中单菌发酵组IMAU10585pH值显著低于对照组（P<0.05）；各试验组的乳酸含量均高于对照组。
　　综合结果表明，添加植物乳杆菌IMAU80162、IMAU10585和IMAU20013，可抑制饲料中霉菌、酵母菌、大肠杆菌的生长、显著降低青贮饲料pH，能够作为潜在的青贮饲料添加剂进行进一步研究。

目录

1引言

1.1 饲料

1.1.1 我国饲料应用现状

1．1．2饲料霉变产生的的危害

1．1．3 娄地青霉对饲料的危害

1．1．4 饲料霉菌污染的防治措施

1．2．1 青贮饲料的优越性

1．2．2 青贮饲料添加剂

1．3 乳酸菌在青贮过程中的作用

1．3．1 乳酸菌及其分类

1．3．2 乳酸菌的抑菌作用机制

1．3．3 乳酸菌发酵剂在青贮玉米秸秆饲料中的作用

1．4 本课题立题意义及主要研究内容

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 菌株来源

2．2．1 具有抑制娄地青霉作用的植物乳杆菌的初筛

2．2．2 植物乳杆菌菌株的耐酸性试验

2．2．3 温度对植物乳杆菌抑菌活性的影响

2．2．4 菌株生长速率和产酸速率的测定

2．2．5 筛选出的植物乳杆菌在青贮饲料中的应用

2．3 数据统计分析

3．1 植物乳杆菌初筛

3．2 植物乳杆菌的耐酸性结果

3．3 温度对植物乳杆菌抑菌活性的影响

3．4 菌株生长速率曲线和产酸速率曲线的绘制

3．5．1 各组在发酵期间乳酸菌活菌数的变化

3．5．2 各组在发酵期间霉菌活菌数的变化

3．5．3 各组在发酵期间酵母菌活菌数的变化

3．5．4 各组在发酵期间大肠杆菌活菌数的变化

3．5．5 青贮饲料发酵过程pH值的变化

3．5．6 青贮饲料发酵过程乳酸含量的变化

4 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介